BTH处理对甜瓜苗期抗蔓枯病相关POD与PPO酶活性影响.docVIP

BTH处理对甜瓜苗期抗蔓枯病相关POD与PPO酶活性影响 　　摘 要： 研究了BTH处理和蔓枯病病原菌接种对甜瓜抗蔓枯病相关的POD和PPO的影响，结果表明，BTH处理能有效提高不同甜瓜品种对蔓枯病的抗性。BTH处理第1、2和4天，抗蔓枯病品系PI420145’和蔓枯病感病品种伊丽莎白的第3叶和第5叶的POD和PPO酶活性均高于对照；BTH和蔓枯病病原共同处理第1、3、5、7天，PI420145’和伊丽莎白的第3叶和第5叶的POD和PPO酶活性高于蔓枯病病原菌处理；所有的处理中PI420145’的POD和PPO的酶活性均高于伊丽莎白。表明POD和PPO酶活性与甜瓜对蔓枯病的抗性呈正相关。 关键词： 甜瓜； 蔓枯病抗性； BTH处理； POD； PPO 甜瓜是一种世界性的蔬菜作物[1]。蔓枯病是一种危害十分严重的土传真菌病害，在田间、温室和日光温室都有发生，能够对甜瓜的生产造成严重的经济损失[2-7]。中国是世界首要的甜瓜生产和消费国，目前甜瓜的生产也受到蔓枯病的危害。 BTH是一种广谱的抗真菌防护剂[8-9]，能够诱导植物产生系统获得抗性，已在烟草[10]、棉花[11]、小麦[12]、水稻[13]、西瓜[14]、黄瓜[15]和甜瓜[16]等作物上广泛应用，并取得了良好的效果。 植物系统获得抗性是一种广谱的生物防护体系，能对特定的真菌和外界其他环境的刺激使植物产生相应的抗性[17]。其调节机制之一是对防护相关的酶活性的调节[18]。POD是细胞壁主要成分木质素合成途径中的一种关键酶，POD酶活性与植物抗性相关物质的合成和植物系统性诱导抗性呈正相关[19]。PPO是多酚化合物氧化过程的关键酶，通常被作为细胞的氧化指标[20]。罗婵娟等[21]用BTH 处理橡树古铜期叶片，发现POD酶活性显著高于对照，橡树对白粉病的抗性也有显著的增强。张俊华等[22]通过测定接种Phytophthora capsici的南瓜属不同作物的POD和PPO活性，发现POD和PPO酶活性与其抗病能力紧密相关。王红英等[23]通过测定不同抗性的甜瓜，发现感病品种PPO酶的活性显著高于抗性品种。 本研究是在前人研究BTH在诱导甜瓜产生蔓枯病抗性的基础上，测定与抗病相关的氧化酶活性，明确BTH诱导甜瓜产生蔓枯病抗性与其抗氧化酶活性的关系，并试图说明其诱导抗性产生的生理生化机制。 1 材料与方法 1.1 材料 供试材料：PI420145’为抗蔓枯病甜瓜自交系，由美国康乃尔大学Molly John教授提供；伊丽莎白为感蔓枯病甜瓜品种，由新疆农业科学院哈密瓜研究中心提供。抗病和感病材料均经过本课题组多代自交。 供试菌种：蔓枯病菌为本实验室分离纯化并保存的A型菌株，菌株的分生孢子在仅含磷酸二氢铵的马铃薯平板培养基上，经7 d暗培养和4 d间歇紫外灯（12 h紫外灯/12 h黑暗）处理的光照条件下产生[24]。 供试试剂：BTH由日本株式会社生产，其他试剂均为国内分析级试剂。 1.2 方法 选取大小一致的甜瓜种子，温汤浸种，种植在装有蛭石、珍珠岩为3 ∶ 1 基质的营养钵中，苗期，每隔1 d浇 1/2-Hoagland营养液，土壤持水量保持在75%。 1.3 试验处理 参照代春燕等[25]试验处理方法并稍作修改。在甜瓜5叶1心期，对第3叶喷施含有50 mg·L-1 的BTH溶液，以喷施不含BTH的溶剂为对照，7 d后，进行蔓枯病菌接种，蔓枯病孢子悬浮液的接种浓度为1×105个·mL-1，并覆膜在相对湿度为92%～95% 的条件下保湿，然后在处理后第1、2、4、7、9、11、13天，每个处理分别取第3和5叶作为样品，液氮保存，每重复5株，相同样品混合组成混样池，3次生物学重复。 1.4 生理指标测定 参照Mu[n][～]oz-Mu[n][～]oz 等[26]测定POD的方法，并稍作修改。酶液提取：称取2 g样品液氮研磨成粉末，加入6 mL 50 mmol·L-1预冷的磷酸缓冲液（pH 7.8）在4 ℃ 条件下，提取20 min，转入离心管中在4 ℃、12 000 × g下离心20 min，上清夜即为酶粗提液。反应混合液的配制：取50 mL PBS（pH6.0，0.2 mol·L-1）缓冲液于烧杯中，加入28 μL愈创木酚（2-甲氧基酚）于磁力搅拌器上加热搅拌，直至溶解愈创木酚溶解，待溶液冷却后加入19 μL 30% 的H2O2，混匀后保存于冰箱中备用。参照孔祥生和易现峰[27]测定PPO的方法。 2 结果与分析 2.1 BTH和蔓枯病接种对甜瓜叶片POD酶活性的影响 从表1可以看出，经BTH处理后，伊丽莎白和PI420145’第3叶POD酶活性逐渐升高，处理4