苯乳酸的快速检测研究.PDFVIP

苯乳酸的快速检测研究 沐万孟 ，周宏敏。，刘凤丽 ，李兴峰 ，陈 超 ，罗昭锋 ，江 波 1(江南大学食 品科学与技术 国家重点实验室，江苏 无锡 ，214122) 2(中国科学技术大学合肥微尺度物质科学国家实验室 中国科学技术大学生命科学学院，安徽 合肥，230027) 摘 要 苯乳酸是一种新型生物防腐剂。文 中研究了苯乳酸 的薄层层析快速检测方法、反相高效液相色谱分析 检测法，并利用手性柱高效液相色谱分析检测 D-型和L一型苯乳酸。 关键词 苯乳酸 ，薄层层析 ，反相高效液相色谱，手性柱高效液相色谱 苯乳酸 (phenyllacticacid，PLA)，也称 3一苯基乳 效液相色谱试剂均为色谱纯 ，其他试剂均为分析纯试 酸或 8一苯乳酸 ，即2一羟基一3一苯基丙酸，是近年来发现 剂 。RSGF254薄层层析硅胶板购 自烟台江友硅胶开 的一种新型生物 防腐剂 。1998年 ，苯乳酸首次被发 发有 限公司 。 现对单 核细胞增生李斯 特菌 (Listeriamonocyto- 1．2 实验方法 genes)有很强的抑制作用口；随后人们相继发现苯乳 1．2．1 苯乳酸样 品的获得 酸具有很广的抑菌谱 ，对多种食源性致病菌如革兰氏 型苯乳酸、L_型苯乳酸、D／L一苯乳酸标样分别 阳性细菌、革兰氏阴性细菌及引起食 品腐败的真菌都 用去离子水配制成 1mg／mL。 有抑制作用_2]。苯乳酸稳定性高，安全无毒；相 比于 苯乳酸发酵样品的获得 [8]：利用 自行筛选 的乳酸 nisin，苯乳酸抑菌谱 宽，溶解性好 ，易于在食 品体系 菌Lactobacillussp．SK007，以含苯丙酮酸底物 (含 中扩散，具有宽广 的PH范 围和热稳定性 ，因此有望 量为 5g／L)的MRS培养基发酵培养 ，3O℃静置发 开发成一种新型生物防腐剂应用于食 品工业l3]。 酵 24h；4000r／min离心 10rain，弃菌体 ，取发酵上 苯乳酸的生物合成方法主要是通过乳酸菌发酵 清液为苯乳酸发酵样品进行检测分析。 生产获得l6]。乳酸菌发酵过程 中，苯乳酸合成途径推 1．2．2 薄层层析检测 测可能是苯丙氨酸代谢 的分支 ，首先 L一苯丙氨酸被 吸取 5～8 L的样 品，点样至硅胶板 ，进行薄层 脱氨生成苯丙酮酸 ，再经过乳酸脱氢酶加氢还原生成 层析检测分析。展开剂 (三氯 甲烷)： (甲醇)： 苯乳酸 ，而根据脱氢酶 的种类不 同，生成的苯乳酸构 V(冰醋酸)一8：1：0．1；层析结束后在 85℃加热 型亦不同 。 10min，先用 0．1g／mL硫酸 的甲醇溶液处理 ，烘干 建立苯乳酸的快速检测方法，对于苯乳酸发酵生 后再用 0．05g／mL磷钼酸的甲醇溶液进行显色 ，再 产菌株的筛选 、定性定量检测、发酵优化具有重要意 置于 11O℃中加热 10min，观察现象，样品在 白色背 义 ；对苯乳酸的构型分析及不 同构型苯乳酸含量测 景上呈现蓝色斑点。 定 ，对 于苯乳酸合成代谢机制及优化控制具有重要 的 1．2．3 反相 高效液相 色谱 基础意义 。本文分别建立 了薄层层析和反相高效液 利用反相柱高效液相色谱法 (RP—HPLC)检测分 相色谱方法 ，快速检测苯乳酸；并建立手性柱高效液 析苯乳酸 。HPLC条件 ：Agilent1100高效液相色 相色谱方法快速检测苯乳酸的构型和分别定量。 谱，色谱柱 ：AgilentZorbaxSB-Cl8柱 (4．6mm × 150mm，5tLm)；流动相：A为 0．5g／L三氟 乙酸 ，B 1 材料与方