白血病细胞株K562中HIF1-α的表达及其对下游基因的影响.pdfVIP

第 31卷第 2期 同济 大 学 学 报 (医 学 版 ) VO1．31NO．2 2010年 4月 JOURNALOFTONGJIUNIVERSITYrMEDICALSCIENCE) Apr．，2010 doi：10．3969~．issnlO08—0392．2010．02．005 · 基础研 究 · 白血病细胞株 K562中HIF1一 的 表达及其对下游基因的影响 黄滨滨，修 冰，陆惠娜，秦 伟 ，熊 红 ，梁爱斌 (同济大学 附属 同济 医院血液科 ．上海 200065) 【摘要】目的 探讨白血病细胞株K562中低氧诱导因子l—c~(HIF一1)表达的增加对下游靶基因的影响及意义。 方法 氯化钴 (CoC12)做化学缺氧诱导剂，加入 K562细胞培养基 ，分别培养 0…4816h。Real—TimeRT—PCR及 Western印迹法分别检测 F—仅rnRNA和蛋 白水平的表达 Real—TimeRT—PCR检测不 同时间HIF—l 下游靶基 因VEGF、MDR1M／DR3、survivin、Bcl一2、Caspase一3、Bax等的表达。分析 H1F一1 表达的变化对下游基 因转录活性的 影响和意义 结果 随着CoC1作用时间的增加 ，K562细胞 H 一JdmRNA 水平表达略有增加 ，但变化不大 (P 0．05)，蛋 白水平增加 明显 。下游 VEGF、MDR1M／DR3、survivin、Bcl一2转录活性增加 (P0．05)，而Bax、Caspase一3表 达先增加后减少。结论 CoC12主要增加K562细胞株 H1F—let蛋 白的表达。HIF一1d蛋 白使 VEGF、MDR1M／DR3、 survivin、Bcl一2等促肿瘤存活基 因的转录活性增加 ，而最终减少了Caspase一3、Bax等促肿瘤细胞凋亡基 因的表达。 因此 ．HIF一10【可能是调控 白血病进展的关键调节 因子。 【关键词】K562；低氧诱导因子1一；血管内皮生长因子；多药耐药基因；survivin；Bcl一2；Bax；Caspase一3 【中图分类号】R557*．1 【文献标志码】A 【文章编号】1008—0392(2010)02—0019—04 TheexpressionofHypoxia—InducibleFactor。10【andits functionalactivities inleukemiacelllineK562 HUANGBin—bin，XIUBing，LUHui—Ha，Q，ⅣWei，XIONGHong，LIANGAi—bin (Dept．ofHematology，TongjiHospital，TongjiUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200065，China) A【bstract】Objective TostudytherelationshipbetweentheexpressionofHIF一1仅anditstarget genesinchronicmyeloid1eukemiacel1lineK562．M ethods CoC12wasusedasthechemicalinducer tomimichypoxiaenvironment．K562cellswereculturedwithCoC12for0，4，8and16hrespectively， andrecordedasH0h．H4h．H8handH16h groups．Real—TimeRT-PCR andW esternblottechnique wereappliedtotesttheexpressionofHIF—loLmRNA andprotein．ThetargetgenesincludingVEGF． MDRl，MDR3。survivin，Bcl一2，Caspa