共表达PRRSVGP5和N蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定.pdfVIP

2013，47(12)：13～16／杨 雷，等 中国兽药杂志 ·13· 共表达 PRRSVGP5和N蛋 白重组杆状病毒的 构建与鉴定 杨 雷，漆世华，温文生，李玉萍，王焕君，谢红玲 (武汉中博生物股份有限公司，武汉430070) [收稿 日期]2013—09—05 [文献标识码]A [文章编号]1002—1280(2013)12-0013—04 [中图分类号]$852．65 [摘 要] 利用杆状病毒双表达系统构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP—PRRSV)N蛋 白和GP5蛋 白的重组杆状病毒Bac—N—GP5，对重组病毒进行间接免疫荧光、Westernblot分析以 及动物免疫试验。结果表明：重组杆状病毒中表达了重组N和GP5蛋 白，重组杆状病毒免疫小鼠后 产生了抗PRRSVGP5蛋 白和N蛋 白的特异性抗体。本试验成功构建共表达PRRSVN蛋 白和GP5 蛋 白的重组杆状病毒，为下一步应用该重组杆状病毒作为基因工程亚单位疫苗奠定基础。 [关键词] 猪繁殖与呼吸综合征；共表达；N蛋 白；GP5蛋 白 ConstructionofRecombinantBaculovirusfor Co—expressingPRRSV GPI5andN Proteins YANGLei，QIShi—hua，WENWen—sheng，LIYu—ping，WANGHuan—jun，XIEHong—ling (WuhanChopperBiologyCoLtd，Wuhan430070，China) Abstract：InordertocombinethehumoralimmunityofGP5proteinandcellularimmunityofN proteinofhighly pathogenicporcinereproductiveandrespiratory syndromevirus，identification by indirectimmunofluorescence， western blot，resultsshowed thatrecombinantbaculoviursesBac—N — GP5 CO —expressed theN and GP5 proteins．AfterimmunizationinBALB／cmicewithcelllysatestreatedbyaluminium adjuvant，Bac—N—GP5 inducedstrongN andGP5一specificELISA antibodies．Theseresultssuggestedthattherecombinantbaculoviurses canbeapotentialgeneticengineeringvaccineagainstPRRSV infections． Key words：PRRS；CO—expression；N protein；GP5protein 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PorcineReproduc- 病毒属的单股正链RNA病毒。其全基因组长约 15 tiveandRespiratorySyndromeViurs，PRRSV)主要引 kb，含有9个开放阅读框 (ORFs)，0RFla和0RFlb 起妊娠母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道疾病及免疫 编码蛋 白聚合酶，ORF2～7分别编码结构蛋 白 抑制和持续性感染，死亡率不断升高 ¨-2]。1996年 GP2a、GP2b、GP3、GP4、GP5、M和N蛋 白 。其中， 郭宝清等 首次从国内疑似猪繁殖与呼吸综合征 N蛋白也称核衣壳蛋 白，由0RF7编码，在病毒粒子 (PorcineReproductiveand Respiratory Syndrome， 中含量较高，N基因高度保守。N蛋 白约 15kD，至 PRRS)感染猪群 中分离出PRRSV，从而证实了本病 少有 5个抗原决定簇，其中包括两型的共同决定簇 在我国的存在。PRRSV是动脉炎病毒科、动