高山被孢霉淬灭方法及胞内代谢产物的气相色谱-质谱分析比较.pdfVIP

第 11卷第6期 生 物 加 工 过 程 Vo1．11No．6 2013年 11月 ChineseJournalofBioprocessEngineering NOV．2013 doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2013．06．013 高山被孢霉淬灭方法及胞 内代谢 产物的气相色谱一质谱分析比较 刘 欣 ，傅宁华 ，张红漫 ，纪晓俊 ，张 鑫 ，杨健健 ，黄 和 (1．南京工业大学 生物与制药工程学院 材料化学工程国家重点实验室，南京 210009； 2．南京工业大学 理学院，南京 210009) 摘 要：在花生四烯酸生产茵高山被孢霉代谢组学研 究中，需利用胞 内代谢物的提取手段并基于气相 色谱一质谱 (GC-MS)分析方法对其进行检测。比较 了3种胞 内代谢物提取方法及不同色谱柱条件下GC，MS分析结果。研究 表明：采用冷甲醇淬灭分别较液氮直接淬灭及真空过滤后，减少了胞 内代谢物的泄露并更好地 实现了胞~l-~x胞 内 代谢物的分离。在对代谢物分析的比较中，极性色谱柱(DB—FFAP)检 出的代谢物仅为 l1种，主要为有机酸、醛类； 而代谢物经衍生化后采用非极性色谱柱 (DB一5)共检 出32种化合物 ，主要为糖、糖苷及醇类。 关键词：花生四烯酸；高山被孢霉；代谢组学；代谢产物；取样；GC—MS分析 中图分类号：S182 文献标志码：A 文章编号：1672—3678(2013)06—0063—05 Comparison ofsamplingmethodofintracellularmetabolitesin M ortierellaalpinaandtheanalysisofthemetabolitesbyGC．M S LIUXin，FUNinghHa，ZHANGHongman，JIXiaojun，ZHANGXin，YANGJianjian，HUANGHe (1．StateKeyLaboratoryofMaterials—OrientedChemicalEngineering，CollegeofBioteehnologyand PharmaceuticalEngineering，NanjingUniversityofTechnology，Nanjing210009； 2．CollegeofSciences，NanjingUniversityofTechnoloyg，Nanjing10009) Abstract：In themetabolomics study on arachidonicacid production byMortierella alpina，sampling methodof intracellularmetabolitesand their detection based on GC—MS analysisare needed．The comparisonsofthreesamplingmethodsandGC—MSanalysisresultsintwochromatographiccolumnswere carriedout．Theresultsshowed thatcoldmethanolquenchingcausedlessmetabolitesleakageandmore effectiveseparation ofextra-and intracellularmetabolitesthan directquenching in liquid nitrogen and vacuum filtrationfollowedbyquenchinginliquidnitrogen．Inthecomparisonofanalysisofmetabolites， only11metabolitesweredeterminedbypolarcolu