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姜黄素对CNE―2细胞放射敏感性和机制影响 　　摘要： 目的：探讨姜黄素（Cur）对鼻咽癌细胞CNE-2放射敏感性及机制的影响。方法：克隆形成实验检测姜黄素对细胞放射敏感性的影响，Graph prism 6.0拟合细胞存活曲线；流式细胞术（FCM）分析细胞周期变化；基因芯片技术检测细胞长链非编码RNA表达差异，Real-time PCR验证部分差异表达基因。结果：10 μmolL-1Cur作用24 h后，其放射增敏比1.03，表明低浓度的Cur可以增加鼻咽癌细胞的放射敏感性；FCM显示Cur联合照射组G2期细胞显著增加，S期细胞显著下降。GUCY2GP，H2BFXP，LINC00623等lncRNA 在姜黄素组细胞中显著上调，ZRANB2-AS2，LOC100506835，FLJ36000等lncRNA在姜黄素组细胞中显著下调。结论：Cur对人鼻咽癌细胞CNE-2具有放射增敏作用，其机制可能与改变细胞周期的分布和长链非编码RNA的表达有关。 关键词： 姜黄素；放射增敏；细胞周期；基因芯片；长链非编码RNA [收稿日期] 2013-05-27 [基金项目] 国家自然科学基金项目；广东省科技计划项目（2013；广州市海珠区科技计划项目（2013-cg-29） [通信作者] *范钦，副研究员，TelE-mail：fqin@163.com [作者简介] 王启瑞，讲师，博士，E-mail： wqrv@ 鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国南方地区的一种常见恶性肿瘤，占我国头颈部恶性肿瘤的首位，病因与遗传有一定关系。由于其特殊的病理类型、生物学行为和解剖结构，放射治疗（放疗）仍是首选的治疗方法。然而单纯放疗的鼻咽癌病人5年生存率约为50%，治疗失败的原因之一是鼻咽癌组织中存在一定比例（10%～20%）对放射线有抗拒作用的细胞，而且这些具有抗拒作用的细胞使肿瘤更具有侵袭性，容易发生淋巴结及远处转移[1]。因此研究其放射抗拒的机制、寻找放射增敏途径成为亟待解决的问题。研究发现姜黄素（curcumin，Cur）对多种恶性肿瘤有抑制作用[2-4]，并能增加肿瘤细胞对放射线照射的敏感性[5]。本研究拟探讨Cur对人鼻咽癌细胞CNE-2是否具有放射增敏作用，并研究其增敏机制，为寻找NPC的放射增敏剂提供理论依据。 1 材料 1.1 细胞培养 人低分化鼻咽癌CNE-2细胞株（中山大学肿瘤防治中心惠赠），培养于含有10%热灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液中，37 ℃，5%CO2，饱和湿度条件下培养。选取对数生长期细胞进行实验。 1.2 药品与试剂 姜黄素（中国食品药品检定研究院，批号110823-201004）；胰蛋白酶、RPMI-1640培养液（吉诺生物医药技术有限公司）；四季青胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司）；细胞周期检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）；RNA 提取试剂、RT-PCR 试剂盒及所用酶（TaKaRa生物公司）；SBC Custom Human lncRNA 8*60K芯片由上海伯豪生物技术有限公司提供并检测。 1.3 仪器 二氧化碳培养箱（Thermo Scientific），超净工作台（苏净集团安泰公司），流式细胞仪（BD FACSCalibur，美国），直线加速器（varian.600C/D，美国）。 2 方法 2.1 克隆形成试验检测姜黄素联合照射对CNE-2细胞的放射增敏作用 将处于对数生长期细胞按照不同吸收剂量接种不同细胞数至6孔板中，分为姜黄素组和照射组，姜黄素组给予10 μmolL-1的姜黄素作用24 h后，与照射组一起分别接受0，2，4，6，8 Gy 6 MV的X射线照射，继续培养2周，甲醇固定，吉姆萨液染色30 min，自然晾干后进行克隆计数。细胞数≥50个的集落被作为存活克隆予以计数。集落形成率（PE）=形成集落数/细胞接种数×100%；存活分数（SF）=实验组集落形成率/对照组集落形成率。 2.2 流式细胞术检测姜黄素联合照射对CNE-2细胞周期的影响 取对数生长期细胞，经0.25%胰酶消化，接种于6孔板中，分为空白对照组、姜黄素组（10 μmolL-1）、照射组、姜黄素（10 μmolL-1）+照射组。姜黄素预处理24 h后照射，照射后24 h收集细胞。收集的细胞以 PBS 洗涤，1 000 rmin-1离心4 min，2 次，加入含RNase A的PI染色液 0.5 mL，37 ℃避光染色30 min，上机检测。 2.3 基因芯片检测姜黄素对CNE-2细胞长链非编码RNA的影响 取对数生长期细胞， 接种于6孔板中，分为