第四章 蛋白质化合物.pptVIP

根据蛋白质带电性质的分离方法  ——离子交换层析 根据蛋白质带电性质的分离方法  ——电泳 根据蛋白质带电性质的分离方法  ——电泳 利用分子专一性不同的分离方法——亲和层析 返回 蛋白质的其他性质 紫外吸收性质－－A280nm 蛋白质的变性 1、可逆变性 2、不可逆变性 颜色反应－－蛋白质的定量 1、双缩脲反应 2、酚试剂反应（lowry) 3、染料 蛋白质含量测定及纯度测定 1．定氮法：？ 2．紫外吸收法：？ 3．双缩脲法：肽键 4．Folin-酚试剂：肽键 5．考马斯亮蓝法： 蛋白质含量测定及纯度测定 纯度测定方法有哪几种？ SDS：高效凝胶过滤色谱：电喷雾离子化质谱：等电点测定： 1．构成蛋白质的氨基酸有 种，碱性氨基酸有 种，它们分别是 氨基酸和 氨基酸；酸性氨基酸有 种，分别是 氨基酸和 氨基酸。 2. 紫外吸收法（280nm）定量测定蛋白质时其主要依据是因为大多数可溶性蛋白质分子中含有 氨基酸、 氨基酸或 氨基酸。 3.当氨基酸溶液的pH＝pI时，氨基酸（主要）以 离子形式存在；当pH＞pI时，氨基酸（主要）以 离子形式存在；当pH＜pI时，氨基酸（主要） 以 离子形式存在。 4．精氨酸的Pk1=2.17、Pk2=9.04（?-NH3）Pk3=12.48（胍基）PI=（ ） A、1/2(2.17+9.04) B、1/2(2.17+12.48) C、1/2(9.04+12,48) D、1/3（2.17+9。04+12。48） 1、蛋白质经酸水解可破坏全部色氨酸以及部分含羟基氨基酸。 2、酶水解蛋白质反应条件温和，不破坏色氨酸也不产生外消旋，但副产物多。 3、氨基酸在水溶液中或在晶体状态时主要时以两性离子的形式存在。 4、组成蛋白质的二十种氨基酸都有旋光性。 5．由于静电作用，在等电点时氨基酸的溶解度最小。 6．构成蛋白质的天然氨基酸，其D－构型和L－型普遍存在。 思考题 1 蛋白质准备方案要求将透析过的蛋白质溶液通入凝胶过滤层析柱，然后收集最先洗脱的蛋白质碎片和洗脱液，剩余物弃去。这些步骤说明了哪些关于该蛋白质的事实？ 思考题 2 溶液中含有氨基酸Asp和Lys，通入强酸性离子交换层析柱，若原溶液的PH为7，则哪一种氨基酸先被洗脱？ 思考题 肌肉中氧携带者是肌球蛋白，下列哪些氨基酸最可能位于该分子内部？ Leu, Asp, Phe, Met, Val, Ala 极性氨基酸通常位于分子表面，但一些氨基酸如Ser和Asn通常位于分子内部，为什么？ 蛋白质的三级结构 蛋白质的三级结构指多肽链中所有氨基酸残基的空间关系，其具有二级结构或结构域。 球状蛋白质分子的三级结构 一条多肽链通过部分的α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲而形成紧密的球状构象。 大多数非极性侧链（疏水基团）总是埋藏在分子内部，形成疏水核 大多数极性侧链（亲水基团），总是暴露在分子表面，形成一些亲水区。 为什么有些极性氨基酸可以存在于球形蛋白质的内部？如Ser, Arg等。 球型蛋白质的活性中心 例：肌红蛋白的三级结构 返回 在球状蛋白质表面，往往有一内陷的疏水的空穴（裂隙、凹槽），能够容纳一或二个小分子配件或大分子配体的一部分，它常常是蛋白质活性中心。 维系这种特定结构的力主要有氢键、疏水键、离子键和范德华力等。尤其是疏水键，在蛋白质三级结构中起着重要作用。 蛋白质的四级结构 蛋白质的四级结构是由两条或两条以上各自独立具有三级结构的多肽链（亚基）通过次级键相互缔合而成的蛋白质结构。 返回 维持蛋白质分子构象的化学键 维持蛋白质分子构象的化学键有 氢键 疏水键 范德华力 盐键 二硫键等 返回 三级结构示意图。在折叠蛋白质中，二级结构元件折叠成为一个紧密的、近乎坚硬的物体，由极性和非极性基团都参与的弱相互作用所稳定。 蛋白质周围的水分子层 蛋白质构象的研究方法 测定蛋白质在溶液中的整体或部分构象 蛋白质分子全部空间结构的测定 返回 荧光光谱 紫外差吸收光谱 近紫外圆二色性光谱分析 X射线晶体衍射 多维核磁共振方法(NMR) 作用力总结 一级结构：共价键 二级结构：氢键 三级结构： 离子键 疏水作用 范德华力 氢键 四级结构： 疏水作用 二硫键 离子键 4.5 蛋白质的分子结构与功能的关系 分子构象与功能的关系 蛋白