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救必应中总苷类物质提取技术探究 　　摘要：目的 制定中药救必应中总苷类物质的提取工艺。方法 以高效液相色谱法测定的长梗冬青苷、紫丁香苷提取得率为指标，以L9（3）4正交设计进行提取工艺中多项参数的优化，采用优化的参数进行实验室提取，通过对提取物成分分析判断该工艺的可行性。结果 救必应中总苷类物质最佳提取工艺为：每次用12倍量的50%乙醇为溶剂，加热回流90 min，提取3次。总苷类提取物的得率为19.5%，其中含长梗冬青苷（292 mg/g）、紫丁香苷（59.5 mg/g）、芥子醛葡萄糖苷、丁香树脂醇4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香树脂醇4，4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等苷类化合物。结论 采用优化的实验室工艺进行提取，提取物中含有多个苷类物质。对提取物的分析表明该提取工艺切实可行。 关键词：救必应；苷类物质；提取工艺；长梗冬青苷；紫丁香苷 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.023 中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0061-03 中药救必应为冬青科常绿乔木植物铁冬青Ilex rotunda Thunb.的干燥树皮，具清热解毒、利湿止痛之功效，可用于暑湿发热、咽喉肿痛、湿热泻痢、脘腹胀痛、风湿痹痛、湿疹、疮 疖、跌打损伤[1]。药理研究认为，救必应的乙醇提取部位具有较强的抑菌和抗炎作用[2]，对应激性高血压大鼠有降压和减慢心率的作用[3]；正丁醇提取物具有抗心律失常、抗心肌缺血[4]、降压和减慢心率的作用[5]。救必应富含苷类化学成分，曾从中分离得到长梗冬青苷、紫丁香苷、芥子醛葡萄糖苷、丁香树脂醇4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香树脂醇4，4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3β-[（α-L-吡喃阿拉伯糖基）氧]-19α-羟基齐墩果-12-烯-28-羧酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯、咖啡酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、香草酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等多个苷类化合物，以及芥子醛、丁香醛、3-乙酰齐墩果酸、硬脂酸、木栓酮、3-羟基齐墩果烷、十九烷酸等非苷类结构的化合物[6-7]。其中，长梗冬青苷、紫丁香苷是其中2个主要化学成分[8-9]，在2010年版《中华人民共和国药典》救必药材中的含量限定为不得低于4.5%和1.0%[1]。本研究以这2个化合物的转移程度为指标，进行救必应中总苷类物质提取工艺的优化，并通过对提取物的测定而评判提取工艺的科学性。 1 仪器与试药 Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括G1329A自动控温的自动进样器、G1311A四元泵、G1315B DAD检测器、G1316A柱温箱、Agilent Chemstation色谱工作站；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；KQ-100E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FW135型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；LD5-10离心机（北京金立离心机有限公司）。 救必应药材，购自广州采芝堂药业有限公司，经广州市药品检验所刘柏英主任药师鉴定，为冬青科植物铁冬青Ilex rotunda Thunb.的干燥树皮，样品编长梗冬青苷等对照品均为自制，其中长梗冬青苷纯度为99.6%、紫丁香苷纯度为96.0%[9-10]。甲醇、乙腈为色谱纯（德国Merck公司），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Shiseido UG120?C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m）；流动相为乙腈（A）-水（B）（V/V）梯度洗脱，梯度程序为：0-10 min， 10%A；10-20 min，10%→40%A；20-30 min，40%A；检测波长：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃。 2.2 对照品溶液的制备 取对照品适量，精密称定，加50%色谱纯甲醇分别制成每1 mL含长梗冬青苷（Ⅴ）1.020 mg、紫丁香苷（Ⅱ）0.415 0 mg的溶液，以及一定浓度的丁香树脂醇4，4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅰ）、芥子醛葡萄糖苷（Ⅲ）、丁香树脂醇4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅳ）对照品溶液，0.45 m微孔滤膜滤过。 2.3 供试品溶液的制备 取救必应药材粉末（过三号筛）约0.10 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 测定方法 分别精密吸取长梗冬青苷和紫丁香苷对照品溶液与供试品溶液各10 ?L，注入高效液相色谱仪，测定，即得。 2.5 最佳提取