色氨酸酶基因工程菌的活力及其与分析.docx

基因工程论文色氨酸酶基因工程菌的活力与分析学院：医学院专业：医学检验班级:122 姓名：高倩学氨酸酶基因工程菌的活力与分析姓名：高倩 班级：检验122 学号连大学医学院 辽宁 大连 116622摘要：选择并改进了以L-色氨酸为底物测定吲哚的生成量作为色氨酸酶活力测定方法，应用改进的方法测定了7株工程菌色氨酸酶的活力，也对不同诱导时间色氨酸酶的表达与活力关系进行了比较。结果表明工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高，其中11号工程菌比宿主菌高16倍。诱导表达1h时酶活最高，但酶活高低并不与其表达量呈平行关系。关键词：色氨酸酶基因工程菌，L-色氨酸，吲哚，活力，表达Study on the activity of tryptophanaseinGeneticengineering strains and relationshipbetween It and expressionAbstract：The enzyme asssay method based on production of indole from L-try ptophan was selected and improved to measure activities of tryptophanase from s even genetic engineering strains. The relationship between expression and activity of tryptophanase after different induction time is also compared. The results showed that the activities of tryptophanase from genetic engineering strains are greater than that of host strain, and the enzyme activity of No.11 was of 1 6 times as high as that of the host. The enzyme activity reached maximum after one hour induction, but it was not parallel to enzyme expression.Key Words:Tryptophanase genetic engineering strain, L-Tryptophan, Indole, Ac tivity, Expression引言：L-色氨酸是人体内的重要必需氨基酸,主要用于制造复方氨基酸营养输液,并可单独作为抗抑郁剂和催眠剂。色氨酸酶（EC4.1.99.1）在正常情况下催化L-色氨酸降解生成丙酮酸、吲哚和氨，但在高浓度的丙酮酸和氨条件下，它也能有效地催化丙酮酸、吲哚和氨合成L-色氨酸［1］。色氨酸酶的活力测定方法主要有三种：一是Wood等［2］提出的以色氨酸为底物测定吲哚的生成量,该法缺点是吲哚对色氨酸酶有一定的抑制及操作较繁;二是Nakazawa［3］等采用的以丙酮酸、吲哚和氨为底物测定色氨酸的合成量,该法生成的色氨酸可用纸层析或HPLC测定,但前者费时、后者费用较高；三是Suelter［4］发明的以S-O-硝基苯-L-半胱氨酸（SOPC）为底物生成O-硝基苯硫酚的直接分光光度法，该法虽然简便、灵敏，但底物SOPC需自行合成，且前体邻硝基苯胺不易购得，合成收率偏低。 基因工程的发展为人类快速获取一些高效菌种提供了新方法。微生物学家发现微生物对污染物的降解性与其所带的质粒有关。利用降解性质粒的相容性，把能够降解不同有害物的质粒组合到一个菌种中，组建一个多质粒的新菌种，这样能使一种微生物降解多种污染物或完成降解过程的多个环节，或使不带降解性的菌带上质粒从而获得降解性。另外，可采用质粒分子育种，即在选择压力的条件下培养，使微生物发生质粒相互作用和传递，缩短了自然进化所需的时间，以达到加速培养新菌种的目的。降解性质粒DNA体外重组，是在体外对生物大分子DNA进行剪切加工，将不同亲本的DNA重新连接，转移到受体细胞中，通过复制表达使细胞获得新的遗传性状。本文对上述第一种酶活测定方法进行了改进，并用改进的方法测定了色氨酸酶基因工程菌的活力，同时也探讨了工程菌在不同诱导时间下其表达与酶活的关系，旨在筛选出高活力的色氨酸酶工程菌，为工业化酶法生产L-色氨酸提供材料上的保证。1材料1.1菌株和培养基E.coliBL21（DE3）由南京军区医学研究所李光富惠赠,色氨酸酶基因工程菌由本室构建,LB培养基。1.2试剂异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）购自Pr