大赛路手性柱QA及手性分离经验.pdfVIP

优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？ 正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种 类、更换手性柱。 建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？ 流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。如果是中 性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加 二乙胺，添加剂的量一般为 0.1 %。 流动相中醇的含量一开始可以使用 30%，根据样品出峰的快 慢和分离度再调整醇的含量。 流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。 建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？ 根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄 少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。 手性柱使用完了之后如何清洗保存？ 正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v) 的保存溶液冲洗 30 min 即可。反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需 要用水/ 乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗 30 min 即可。 CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量有要求吗？ CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量为 0％-15%，甲醇的含量一旦超过 15%， CROWNPAK® CR(+)柱会被损害。 正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？ 正相手性色谱柱（例如 AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不 超过柱压上限，柱子就不会损坏。只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来， 再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。 样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？ 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。 2、流动相发生变化，解决办法是防 止流动相发生蒸发、反应等。 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况在 MA （+） 柱上出现较多。 4、酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加 入相应的酸碱添加剂即可。 5、流动相污染。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上， 从而造成保留时间的漂移。需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。 （小极性样品的溶解）正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何 解决？ 该方法为 Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线 分离。采用流动相溶解即可。 通常手性分析时，若流动相为 H/I，H/E 体系，且 Hexane 不超过 85%，则溶解样品时可用流动相，也可用 100%醇直接溶解。谱图通常差别不大。但是对小极性样 品和流动相，尤其 hexane 超过 90%时，一定注意用流动相溶解。 新柱 CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE 与原来的大赛璐手性柱有什么区别？ CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE 是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都 是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。正因为是共价键合，所以 CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE 柱能使 用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE 与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在 原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在 CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE 上得以分开。 键合型手性柱 CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE 的再生方式？ 在再生前请先冲洗手性柱，以防止残留物对于再生效果的影响。 IA 柱修复方法：先用 EtOH 小流 速冲洗 30min，再用 DMF，小流速冲洗 3 小时，然后 EtOH 过渡，验柱。若效果不好，再用 EtOH 冲洗 30min，然后THF 冲洗 2 小时。 IB 柱，IC 柱修复方法：用乙酸乙酯冲洗 30min-120min， 在室温下保存 2 天或更久。验柱。 CHIRALPAK® AD-H、CHIRALPAK® AS-H、CHIRALCEL® OD-H、CHIRALCEL® OJ-H 四款最常用正相色谱柱 的区别是什么？ 区别是固定相的种类不同。CHIRALPAK AD-H、AS-H 的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；