坤宁安对围绝经期抑郁大鼠模型海马5HTR1A、 5HTR2A表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 坤宁安对围绝经期抑郁大鼠模型海马5HTR1A、 5HTR2A表达的影响 王晓滨1 王秀霞 2 丛慧芳1 赵锐1 杨东霞1 段志宇1 (1黑龙江中医药大学附属二院 黑龙江哈尔滨 150036) (2黑龙江中医药大学 黑龙江哈尔滨 150040) 【摘要】目的：观察坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马5HTR1A、5HTR2A表达的影响。方法：鼠龄为12-14个月的雌性SD大鼠，采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激造模法，以氟西汀、倍美力作对照药物，观测大鼠海马5HTR1A、5HTR2A表达的变化。结果：抑郁模型组大鼠海马区5HTR1A阳性细胞与对照组性比阳性细胞表达减弱（Plt;0.05）。坤宁安可增加5HTR1A的表达。抑郁模型组大鼠海马区5HTR2A阳性细胞与对照组性比较阳性细胞表达增强（Plt;0.05）。坤宁安能降低5HTR2A的表达。结论：坤宁安能够影响抑郁模型大鼠海马5HTR1A、5HTR2A的表达，可能是其治疗围绝经期抑郁症的机理之一。 【关键词】坤宁安 5HTR1A 5HTR2A 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）09-0058-02 坤宁安是导师王秀霞临床上应用多年治疗围绝经期综合症的经验方，临床应用中我们发现它治疗围绝经期抑郁症的患者也取得了较好的疗效，有关坤宁安对围绝经期抑郁大鼠模型大鼠行为的影响试验已证实其具有抗抑郁作用，本试验观察了坤宁安对围绝经期抑郁大鼠模型海马5HTR1A、5HTR2A表达的影响，以对其作用机理进一步探讨。现将结果具体报道如下： 1 材料与方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物 鼠龄为12-14个月的雌性SD大鼠，体重为280-350g，购自黑龙江中医药大学实验动物中心，室温18-22℃，除特别说明外，大鼠均自由饮水和摄食，自然光照，通风良好。 1.1.2实验药品、试剂与仪器 坤宁安汤剂（柴胡、桂枝、白芍、党参、牡蛎、当归、甘草等药物组成）：由黑龙江中医药大学附属二院饮片药局提供。倍美力片:惠氏制药有限公司分装。规格:0.625mg/片。百忧解胶囊:礼来苏州制药有限公司分装。规格:20mg/粒。5-HTR1A、5-HTR2A免疫组化试剂盒及兔抗多克隆一抗 武汉博士德生物工程有限公司。 1.2实验方法 1.2.1造模 每天进行大鼠阴道脱落细胞检查[1]，选择无规则动情周期的大鼠作为实验动物。将70只围绝经期大鼠随机分为7组：正常围绝经期对照组（对照组）、抑郁模型组（模型组）、倍美力治疗组（倍美力组）、氟西汀治疗组（氟西汀组）、中药低剂量治疗组（中药低剂量组）、中药中剂量治疗组（中药中剂量组）、中药高剂量治疗组（中药高剂量组）。每组10只。抑郁症动物模型建立采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激复合造模法，根据文献方法稍加改进[2][3]。具体方法是：在21天内给大鼠施加不可预见性刺激，刺激方法包括:①4℃冷水游泳，5分钟;②24小时禁水；③48小时禁食；④用止血钳夹尾部1分钟(将动物放入固定笼中，露出尾部，用止血钳夹尾根1厘米处，老鼠发出哀叫声即可)；⑤电激足底(电流强度1mA，持续10s，1次/分钟，共30次)；⑥昼夜颠倒24 h，⑦40℃ 5分钟⑧频闪仪的闪光刺激(120次/min)。每日采用1种刺激，平均每种刺激被采用2-3次，同种刺激不连续出现。对照组不予任何刺激。除对照组外均单笼饲养。 1.2.2给药方法 经人鼠剂量换算，坤宁安方组:按等效剂量1、2、4倍作为低、中、高剂量组剂量标准。倍美力组: 以lml/100g体重灌胃（0.0066mg/ml）。百忧解组:以lml/100g体重灌胃（0.21mg/ml）。模型组:生理盐水灌胃，3ml/只。每日1次，于每次刺激前2小时灌服，连续21天。对照组不加处理。 1.2.3大鼠脑组织灌流取材 大鼠用10%水合氯醛（0.4ml/100g）行腹腔内注射麻醉后，放于木板平台上，沿剑突下剪开腹腔，向上打开胸腔，充分暴露心脏，并于偏左处左心室插管，剪开右心耳，先用200ml生理盐水冲洗，然后用4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液在10分钟内灌注完毕。开颅取脑组织放入固定液（4%多聚甲醛溶液）中固定6小时，再放入30%的蔗糖溶液中，待组织下沉时，取材：参照大鼠脑立体定位图谱，取相同部位脑组织行石蜡包埋。连续冠状切片厚6mu;m，每间隔10片取1张行HE染色及免疫组化。采用免疫组化PV两步法进行检测，同时设阴性对照，以PBS代替一抗。 1.2.4免疫组化统计分