第三章 糖苷.ppt

六、糖的核磁共振性质 D-葡萄糖 六、糖的核磁共振性质 用1H-NMR可判断一些糖的相对构型，但还有一些糖由于其结构上的原因，而无法利用1H-NMR来判断相对构型。如： 六、糖的核磁共振性质 再如： 其它 IR——α葡萄糖苷在770、780 cm-1有强吸收峰； MS——葡萄糖苷乙酰化物331碎片峰强度：α β 六、糖的核磁共振性质 13C-NMR在糖链结构测定中的应用 端基碳——δ97~106 ppm 一般在13C-NMR谱中： 如：D-葡萄糖 六、糖的核磁共振性质 D-葡萄糖苷 C1——α型 97~101 ppm β型 103~106 ppm CH-OH (C2、C3、C4) 70~85 ppm CH2-OH (C6) 62 左右 CH3 20 ppm 用门控去偶技术，可判断呋喃糖的端基碳与端基质子的偶合常数。 α苷键JC-H≈170Hz β苷键JC-H≈160Hz 一、概述 二、单糖的立体化学 三、糖和苷的分类 四、苷类化合物的理化性质 五、苷键的裂解 六、糖的核磁共振性质 七、糖链的结构测定 八、糖和苷的提取分离 第二章 糖和苷 糖苷结构测定的一般程序为： （1）先测定物理常数，如熔点、沸点、比旋光度等； （2）进行元素分析，测定所含的各种元素及其百分比，并测定分子量及分子式； （3）通过化学方法及光谱分析法测定糖苷的组成以及苷元的结构； （4）对组成糖苷的糖进行定性鉴定及糖的分子比测定，对多糖苷还要进行苷元与糖的连接及糖与糖之间连接位置和连接顺序的测定，同时对苷键的构型做出判断。 七、糖链结构的测定 1、糖的种类和比例的测定 糖苷 稀酸水解 过滤 除去难溶性苷元 滤液 加BaOH中和 过滤 滤除BaSO4沉淀 滤液 浓缩 纸色谱或TLC分析； HPLC或GC-MS分析 展开剂选择、显色方法确定 分析柱及流动相选择 硅烷化处理 七、糖链结构的测定 进行糖苷结构分析时，对于各种分析方法应注意的地方： HPLC法：重点在色谱柱和流动相的选择，可采用差示折光检测器； GC-MS法：样品的硅烷化处理，水解条件的控制，应保证完全水解； PC或TLC法：点样量的大小，展开剂的选择，显色剂的使用。 糖分析用显色剂及不同糖的显色反应 显色剂 戊醛糖 己醛糖 己酮糖 糖醛酸 甲基戊醛糖 甲基己醛糖 苯胺邻苯二甲酸 红色 棕色 — 棕色 红色 棕色 三苯四氮盐 红色 红色 红色 — — — 间萘二酚-盐酸 蓝色 紫色 红色 蓝色 蓝色 — 双甲酮磷酸 — — 暗绿色 — — — 七、糖链结构的测定 二 、 分子量及分子式的测定 近年来广泛应用质谱分析的方法则定分子量和分子式。苷类化合物一般极性较大，无挥发性，遇热气化时易于分解，采用电子轰击质谱(EI—MS)常常不能获得分子离子峰。 现多采用化学电离质谱(CI-MS)、场解吸质谱(FD-MS)、快原子轰击质谱(FAB-MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)等方法来获得分子离子蜂，尤其是ESI-MS及FAB-MS两种质谱法更是目前测定苷类分子量常用的方法。 七、糖链结构的测定 电喷雾质谱(ESI-MS)的基本原理 ESI是在毛细管的出口处施加一高电压，所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴，随着溶剂蒸发，液滴表面积缩小，导致分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。电喷雾离子化的特点是产生多电荷离子而不是碎片离子，使质量电荷比降低到多数质量分析仪都可以检测的范围，因而大大扩张了分子量的分析范围。离子的真实分子量可以根据质荷比及所带电荷数计算出，一般由计算机软件完成。电喷雾质谱可忍受少量的盐和缓冲液，但盐和缓冲液的存在会使仪器的灵敏度降低。电喷雾质谱的优点是它可以方便地与多种分离技术联用，如液质联用和毛细管电泳-质谱联用等。 七、糖链结构的测定 三、 组成苷的苷元和单糖的鉴定 将苷用稀酸或酶进行水解，使生成苷元和各种单糖，然后再对这些水解产物进行签定。 (一) 苷元的结构鉴定 苷元