葡萄糖耐量的试验.pptVIP

实验目的 掌握测定血清葡萄糖浓度的原理 掌握血糖变化的临床生理意义 掌握口服葡萄糖耐量试验的原理，适用人群和临床意义。 临床上OGTT主要适用于下列情况：（1）无糖尿病症状，空腹血糖异常，或偶尔出现糖尿，或有明显糖尿病家族史者；（2）有糖尿病症状，血糖水平不够糖尿病诊断标准者；（3）妊娠期或甲状腺功能亢进出现糖尿者；（4）不明原因肾病与视网膜病者。 实验原理 葡萄糖耐量试验（OGTT）是一种葡萄糖负荷试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时性升高，30~60分钟后可升到最高峰，但一般不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调或神经系统功能紊乱，则调节功能失常，食入大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。 血清葡萄糖浓度测定方法 1、GOD-POD法：以过氧化物酶作指示酶的偶联酶反应定量法。葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 反应方程式： GOD 葡萄糖+O2+H2O———— 葡萄糖酸+2H2O2 POD 2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚————红色醌类化合物 2、邻甲苯胺法：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Suchiff碱。 Suchiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比与进行同样处理的标准葡萄糖液相比较，即可求出样品中葡萄糖的含量。由于邻甲苯胺只与醛糖作用显色，故此种测定方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需除去血浆或血清中的蛋白质。 反应方程式： [H+] 葡萄糖——5-羟甲基-2-呋喃甲醛+3H2O 加热 5-羟甲基-2-呋喃甲醛+邻甲苯胺——Schiff碱+H2O 青色 3、其他方法举例 福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法：在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰化铁（普鲁士蓝），与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，即可求出血糖含量。 其反应如下： 血糖测定方法归纳 血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法，是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同ATP反应，产生葡萄糖－6－磷酸及ADP，葡萄糖－6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸脱氧酶存在时，同NADP＋作用．产生NADPH及6—磷酸葡萄糖酸内酯，NADPH在340nm有吸收峰。 应用邻甲苯胺法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量 实验试剂： 1．邻甲苯胺试剂???邻甲苯胺为略带黄色的油状液体，易氧化，配置时易重蒸馏，收集199—201℃时无色或浅黄色的馏出液。取硫脲2.5g，溶解于750mL冰醋酸中，再将此溶液移入1000mL容量瓶，加邻甲苯胺150mL、2.4%硼酸100mL，然后加冰醋酸至刻度。 2．12mmol/L苯甲酸溶液 称取苯甲酸2.5g，加入蒸馏水1000ml,加热助溶，冷却后储存于试剂瓶中。 3.葡萄糖标准贮存液（10mg/mL）??准确称取无水葡萄糖1.0000g,用饱和苯甲酸溶液溶解，移至100ml容量瓶中，稀释至刻度。 4．葡萄糖标准应用液（1mg/mL） 用饱和苯甲酸溶液将葡萄糖标准储存液溶液稀释10倍。  实验步骤： 受试者前三天正常饮食，停用影响血糖的各种药物，如胰岛素、肾上腺皮质素、儿茶酚胺等。试验前1天晚餐后即不再进食（即空腹10~14小时）。 次日清晨空腹抽静脉血2ml（称为空腹血浆血糖，即FPG），然后将75g葡萄糖溶于200 ~300ml温开水中（儿童按每千克体重1. 75g），令受试者5min内服 下。服后0.5小时、1小时、1.5小时、2小时各抽一次血，取七支试管按下表操作： 测定血清中血糖浓度方法：取三支试管，按表操作