静电纺PLA丝素明胶复合纤维膜作为组织工程材料的研究.pdfVIP

静电纺PLA／丝素一明胶复合纤维膜作为组织工程材料的研究 尹桂波1，扩，张幼珠1，王曙东1，王立新1，吴佳林1，施德兵2，董智慧2，符伟国2 (1．苏州大学材料工程学院苏州215021；2．复旦大学附属中山医院，上海200032； 3．南通纺织职业技术学院南通226007) 摘要静电纺丝可构建由纳米纤维组成的组织工程血管，具有高度模仿细胞外基质的能力， 应用于血管移植具有巨大潜力。本文以具有良好生物相容性和生物降解性的PLA、丝素、明 胶为原料，通过静电纺丝法分层构建了PLA／丝素一明胶复合纤维膜，采用特殊收集方法构建 了PLA／丝素一明胶组织工程血管。研究了复合膜的形态结构、机械性能、溶失率和收缩率， 小鼠胚胎成纤维细胞在支架上培养一定时间，sEM和MTT测试了细胞的粘附、增殖和扩展。 结果表明：丝素一明胶共混纳米纤维膜与PLA纤维膜复合经化学处理后，收缩率明显降低， 在水中不溶解，强度达到2．22MPa，并具有较好的柔性(断裂伸长率为7．3％)。小鼠胚胎成 纤维细胞(mouseembryo6broblast，NIH3T3)在该支架上培养12天后，sEM显示细胞粘附在共 混层纤维表面，细胞呈纺锤形并连成整体；MrI．分析表明，细胞在PLA／丝素一明胶复合纳 米纤维膜上的增殖高于聚苯乙烯组织培养板(TcPs)，明胶含量越多，增殖越高。上述结果 说明PLA／丝素一明胶复合纳米纤维膜既有良好的强度和柔性，又能支持细胞粘附、增殖和扩 展，表明其作为组织工程血管支架具有巨大的应用潜力。 关键词静电纺丝纳米纤维细胞支架PLA丝素明胶 近年来，心血管疾病发病率呈明显上升，全球每年大约60万人需要进行手术，大多需 要自体或异体血管移植，而移植物的缺乏正成为困绕疾病康复的难题。组织工程血管(TEBV) 为解决此难题开辟了新的途径，它利用可降解材料构建供细胞黏附和生长的支架 (scaffold)，体外将内皮细胞(Ec)等种子细胞种植于支架，培养一段时间后植入体内， 在体内支架材料不断降解并由宿主自身组织逐步替代，最终的结构和功能类似于自体血管， 由此获得理想的中远期通畅率和抗感染性能，代替人工血管。 获得具有良好力学和生物学性能的支架是制备TEBV的首要条件。Vaz采用静电纺丝法 分层构建了PLA(外层)／PcL(内层)组织工程血管…，尽管血管具有良好的柔性，能够支 持细胞的生长和增殖，但PCL亲水性差，不利于平滑肌细胞的粘附和增殖幢’。有文献报道了 纯丝素静电纺纳米纤维膜作为细胞支架的研究∞“。。明胶与胶原(细胞外基质蛋白)具有相 同的化学组成，保留了胶原大部分的优良理化性能，与生物组织具有良好亲和性¨瑚。。然而， 丝素和明胶通过静电纺丝形成的纳米纤维膜力学性能差，在水中易溶解。目前主要采用化学 交联的方法，通过改变纤维内部微细结构提高强度，降低溶解性，但化学处理后膜的尺寸稳 定性差，膜变脆。PLA是一种合成聚合物，通过静电纺丝形成的纤维膜尺寸稳定性高，具有 良好生物性能‘1·9|。 为获得高强度和高柔性、低溶失率，尺寸稳定性好并具有良好生物性能的细胞支架， 适合用作血管材料，本文通过丝素与明胶共混形成纳米纤维，并与具有良好生物性能的PLA 分层构建复合纳米纤维膜，PLA层纳米纤维膜主要增强膜的尺寸稳定性和柔性，而丝素一明 胶共混纳米纤维支持细胞的生长。测试了经甲醇处理前后的复合纤维膜力学性能、溶失率， 种植小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)，通过SEM和MTT研究了在纳米纤维膜上的粘附和增殖。 1实验 1．1静电纺分层构建PLA／丝素一明胶纳米纤维膜 5 再生丝素室温干燥膜与明胶以70：30、50：50的质量比共混后溶于98％甲酸，PLA溶于 氯仿／丙酮(体积比为2：1)，静电纺形成PLA纤维膜，在己纺制好的PLA纳米纤维上分别 纺制丝素、丝素一明胶不同质量比的纳米纤维，制得PLA／丝素及PLA／丝素一明胶复合纤维膜， 另外按照丝素一明胶静电纺工艺条件制得丝素一明胶共混纤维膜以作对照。将上述复合纳米纤 维于室温下分别浸于无水甲醇中处理60min，室温下干燥24小时。 1．2复合纳米纤维的形貌及性能测试 1．2．1形貌结构 日本日立公司的s一570型扫描电镜(sEM)观察纳米纤维的形貌，复合纳米纤维的PLA 层放大1000倍，丝素一明胶层放大10000倍。 1．2．2性能测试 将纤维膜以l：100的浴比，于37±