16生化药物与基因工程药物分析.ppt

第十六章 生物药物和基因工程药物分析简介 ; 第一节 概 述; 第一节 概 述 ;一、生物药物的概念;（一）生化药物：;（二）生物技术药物;（四）生物制品;生物制品的分类; 1. 生物体的基本生化成分 来自生物体，参与、调控和影响人体代谢和生理功能，在某些疾病治疗时具有针对性强、毒副作用小的特点。部分蛋白质药物，极微量就可产生显著效果。  2. 分子量大: 分子量一般为几千至几十万，结构复杂，甚至不确定，分析和检验困难，常需纯度分析和分子量测定。  ; 3. 结构难确证：各种技术  4. 全过程的质量控制： 对酸、碱、热、pH等敏感，严格控制实验条件和鉴定质量。基因工程药物比传统工艺生产的药物要求更高。 5. 生物活性检查多肽、蛋白质类药物，除采用理化检验外，还需采用生物鉴定法证实其生物活性。; 6. 安全性检查 热源检查、过敏实验、致突变实验 7. 效价（含量）测定： 理化法：生物药物和基因工程药物 效价测定和活性测定：酶类药物;第二节 质量控制的项目和方法; ;（一）理化鉴别法 1.化学鉴别法： 例：溶菌酶 +Cu2+ 络合显色; 2.紫外分光光度法 最大吸收波长固定不变，紫外光谱图一致 溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml 判断： λmax：257±1nm 3. HPLC法： 利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留 时间和肽图谱的一致性进行鉴别。 ; （二）生化鉴别法 1.酶法： 例：尿激酶的鉴别气泡上升法 原理：; 方法： 取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小时内不溶。 ;2. 电泳法：;2. 电泳法：以肝素鉴别为例。;3. 样品脱盐后等电点聚焦法测定;（三）生物鉴别法; 2. 生物法： 利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。 利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。; 一般杂质检查：氯化物、硫酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度等 特殊杂质检查：原料药纯度分析和生产过程中杂质的检查;（二）特殊杂质检查;生化药物和基因药物的含量表示方法：百分含量：适用于结构明确的小分子药 物或经水解后变成小分子的 药物。生物效价或酶活力单位：适用于酶类、 蛋白质类药物。;第三节 定量分析方法;一、理化分析法;（二）电化学分析法;（三）光谱法;（三）光谱法;（三）光谱法;（四）高效液相色谱法;二、生化分析法（一）酶法;1）基本概念： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越高。 酶反应速度可以用单位时间反应底物的减少或产物的增加来表示。;1）基本概念：酶单位：任何一种酶，在25℃以最适当的底物浓度、最适当的缓冲液离子强度以及最适当的pH等条件下，每分钟能转化一个微摩尔底物的酶量定为一个活性单位（国际单位，IU） ;1）基本概念：酶的比活性：为每毫克蛋白质所具有的酶单位数，一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。 ;酶反应进程曲线 纵坐标为底物或产物的变化量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。酶浓度曲线 纵坐标为反应速度，横坐标为酶量。通过酶浓度曲线检验反应测定系统是否适宜。 ;2）酶促反应的条件及影响因素 底物的浓度：一般选用底物的浓度[S]=100Km。 pH：选用一个适宜的缓冲离子和离子强度、 适宜的pH值的缓冲系统来控制pH。 温度：酶反应的温度通常选用25℃、30℃或 37℃，实验中温度变动应控制在±0.1℃以内。 辅助因子：有些酶需要金属离子，有些需要 相