02 氨基酸代谢控制发酵机制及育种策略.ppt

氨基酸代谢控制发酵机制及育种策略;Chapter1 代谢机制理论基础 ;氨基酸发酵机制 ;;;;优先合成 ;平衡合成（balanced synthesis） ;微生物体内代谢过程的各种生物化学反应，都是由各种酶来催化的。按各种酶在代谢调节中作用的不同，又可将酶分为以下三类 调节酶（常称关键酶，与代谢调节关系密切） 变构酶：通过酶分子构象的变化来改变酶活性的一类酶 同功酶：具有同一种酶的底物专一性，但分子结构不同的一类酶 多功能酶：能够催化两种以上不同反应的一类酶 静态酶 一般与代谢调节关系不大的一类酶 潜在酶 指酶原、非活性型或与抑制剂结合的酶;同功酶 酶I和酶Ⅱ都是催化A→B的同功酶。G过量时，酶Ⅱ停止活动，C也不能经过F到G 与此同时，酶I活力不受影响，A可以顺利地到E，从而使G过量，但并不干扰E的合成;反馈抑制与反馈阻遏的比较;协同反馈抑制或称多价反馈抑制 当一条代谢途径中有两个以上终产物时，任何一个终产物都不能单独抑制途径第一个共同的酶促反应，但当两者同时过剩时，它们协同抑制第一个酶反应;合作反馈抑制（Cooperative feedback inhibition） 合作反馈抑制也可称为增效反馈抑制（Synergistic feedback inhibition）。这种反馈抑制不同于协同反馈抑制，也不同于积累反馈抑制 当任何一个终产物单独过剩时，只部分地反馈抑制第一个酶的活性，只有当G、E两个终产物同时过剩存在时，才能引起强烈抑制，其抑制程度大于各自单独存在的和;积累反馈抑制（Cumulative feedback inhibition） 在积累反馈抑制中，每一个最终产物只单独地、部分地抑制共同步骤的第一个酶，并且各最终产物的抑制作用互不影响。所以几个最终产物同时存在时，它们的抑制作用是积累的;顺序反馈抑制(Sequential feedback inhibition) 顺序反馈抑制的过程是：F积累，停止D→E反应，减少F的进一步合成，更多的D转到G，再由G合成I或K；I积累，抑制G→H的反应；K积累，抑制G→J的反应，结果造成G的积累，引起G对A→B的反馈抑制，使整个途径停止;Chapter2 L-谷氨酸;谷氨酸的生物合成途径;谷氨酸的生物合成包括 糖酵解作用（glycolysis, EMP途径） 戊糖磷酸途径（pentose phosphate pathway，HMP途径） 三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle，TCA循环） 乙醛酸循环(glyoxylate cycle) 丙酮酸羧化支路（CO2固定反应）等;生成谷氨酸的主要酶反应;谷氨酸脱氢酶（GHD）所催化的还原氨基化反应 ;转氨酶（AT）催化的转氨反应 ;谷氨酸合成酶（GS）催化的反应;谷氨酸合成酶（GS）催化的反应 ;由葡萄糖生物合成谷氨酸的理想途径; C6H12O6 + NH3 + 3/2O2 C5H9O4N + CO2 + 3H2O ;;谷氨酸发酵的代谢途径;葡萄糖首先经EMP及HMP两个途径生成丙酮酸。其中以EMP途径为主，生物素充足时HMP所占比例是38%，控制生物素亚适量，发酵产酸期，EMP所占的比例更大，HMP所占比例约为26%。 生成的丙酮酸，一部分在丙酮酸脱氢酶系的作用下氧化脱羧生成乙酰CoA，另一部分经CO2固定反应生成草酰乙酸或苹果酸，催化CO2固定反应的酶有丙酮酸羧化酶、苹果酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。 草酰乙酸与乙酰CoA在柠檬酸合成酶催化作用下，缩合成柠檬酸，进入三羧酸循环，柠檬酸在顺乌头酸酶的作用下生成异柠檬酸，异柠檬酸再在异柠檬酸脱氢酶的作用下生成α-酮戊二酸，α-酮戊二酸是谷氨酸合成的直接前体。 α-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶作用下经还原氨基化反应生成谷氨酸;控制谷氨酸合成的重要措施 α-酮戊二酸氧化能力微弱，即α-酮戊二酸脱氢酶活力微弱 谷氨酸产生菌糖代谢的一个重要特征就是α-酮戊二酸氧化能力微弱。丧失α-酮戊二酸脱氢酶的重要性已经用要求生物素和不分泌谷氨酸的大肠杆菌得以证明。甚至发现不要求生物素的一株丧失α-酮戊二酸脱氢酶的突变株，能分泌2.3g/L谷氨酸，而其亲株却什么也不分泌。谷氨酸产生菌的α-酮戊二酸氧化力微弱。尤其在生物素缺乏条件下，三羧酸循环到达α-酮戊二酸时，即受到阻挡。把糖代谢流阻止在α-酮戊二酸的堰上，对导向谷氨酸形成具有重要意义。在铵离子存在下，α-酮戊二酸因谷氨酸脱氢酶的催化作用，经还原氨基化反应生成谷氨酸。 ;;;CO2固定酶系活力强;乙醛酸循环的作用;谷氨酸生物合成的调节机制;优先合成;反馈调节;优先合成 谷氨酸比天冬氨酸优先合成，谷氨酸合成过量后，就会抑制和阻遏自身的合成途径，使代谢转向合成天冬氨酸 磷酸烯醇式丙酮酸羧化