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1 1 毛细管电泳技术简介 试讲：曾金祥 中药种质资源工程 技术研究中心 主要内容 毛细管电泳发展简史 毛细管电泳主要特点 毛细管电泳系统组成单元 毛细管电泳分离原理 毛细管电泳进样方法 毛细管及其温度控制 毛细管电泳检测方法 一、毛细管电泳发展简史 1、概述：什么是毛细管电泳？ 毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)又称高效毛细管电泳、毛细管电分离方法。是一类以毛细管为分离通道，以高压电场为驱动力，以样品多样性为根据的液相微分离技术。是分析科学继高效液相色谱之后的又一重大进展。它使分析科学从微升(10-6)水平进入到了纳升(10-9)水平。它不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质、核酸等生物大分子分析有了新的转机。 一、毛细管电泳发展简史： 2、历史回顾： 1927年，Tesilius发明了U形管式移界电泳技术。这可看作是毛细管电泳技术发展的开端。 20世纪60年代Tesilius 的学生Hjerten用内径为3mm 的石英管来研究细胞的电泳分离。 1981年，Jorgenson和Luacs用内径为75μm的石英毛细管在3万伏的高压电场下实现了40万理论塔板数的空前分离效率。 随后毛细管电泳研究急速升温，许多大科学家和分析厂家也开始参与研究。 一、毛细管电泳发展简史 3、经典毛细管电泳(1927-1981年)的不足： 分离管直径过大：3mm； 分离管长度过短：不足50cm； 应用电压太小：5Kv/m； 结果是毛细管电泳分离重现性受温度影响很大，分析速度相对较慢，分离效率远低于高效液相色谱。 一、毛细管电泳发展简史 4、毛细管电泳的重大突破（1981-）： 采用了内径为50μm的毛细管(常用20 – 100μm)，同时增加了毛细管长度(50 - 75 cm)； 采用了高达数十千伏(30Kv)的分离驱动电压。 毛细管内径的降低使产生的热量能快速散发，大大减小了温度效应，可使分离驱动电压大大提高，从而使分离速度加快。在取得这两项突破之后，毛细管电泳技术的发展突飞猛进。1986年，Lauer报道蛋白质分离的理论塔板数高达100万，分离效率远高于高效液相色谱。与此同时，商用仪器也于1986年推出。 二、毛细管电泳主要特点 分辨率高:理论塔板数高达数百万,甚至数千万. 灵敏度高:检测浓度可低至10-21 mol/L. 分析对象广：大至蛋白质、核酸大分子，小至单细胞到单分子，阴阳离子中性分子都可以进行分析。 分析速度快:可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟内分离19种阳离子;4分钟内可分离10种蛋白质. 试样用量低:仅需几nL（10-9 L）的试样. 仪器简单,成本低廉:分析一个样品仅需几ml溶剂. 绿色环保:所用溶剂大部分是水,对环境非常友好. 三、毛细管电泳系统组成单元 四、毛细管电泳分离原理 要了解毛细管电泳分离原理首先要了解两个概念： 电泳现象 电渗流现象 当毛细管中充满电解质溶液并在毛细管两端施加高压电场时就会出现电泳现象和电渗流现象。 四、毛细管电泳分离原理 电泳现象：电解质溶液中的带电粒子在高压电场的作用下向电极迁移的现象称为电泳现象。其迁移速度称为电泳速度。在电场作用下，正离子向负极移动，负离子向正极移动，中性粒子则无电泳现象。 四、毛细管电泳分离原理 电渗流现象：一般使用的毛细管为石英毛细管，在pH大于3时毛细管管壁的硅羟基电离形成带负电荷的位点，会吸附电解质溶液中的阳离子形成双电层。这种双电层的形成会使电解质溶液整体向电场负极移动，这就是电渗流现象。其速度称为电渗流速度。 四、毛细管电泳分离原理 一般情况下，电渗流的速度远大于电泳速度。所以毛细管电泳分离的原理可以概括如下： 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和。 正离子：两种运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 负离子：两种运动方向相反，但ν电渗流 ν电泳，负离子在负极最后流出。 四、毛细管电泳分离原理 对于带同类电荷的分离对象，因其具有不同荷质比而被分离。可以用下图进行说明（电渗流反向的动态图）： 四、毛细管电泳分离原理 典型的毛细管电泳图： 五、毛细管电泳进样方法 在毛细管电泳技术中，分离通道毛细管和是样品直接接触的。所以在分离分析时样品是直接进入毛细管的。常用毛细管电泳进样方法有如下三种： 电动进样：样品在电场驱动下直接进入毛细管。进样量大小由进样电场和进样时间控制。 压力进样：给毛细管两端施加不同的压力，样品就会在压力差的作用下进入毛细管。进样量大小由压力差与进样时间控制。 扩散进样：利用浓差扩散的原理将样品导入毛细管可以实施进样。 六、毛细管及其温度控制 毛细管是CE分离的心脏，理想的毛细