蛋白质工程与分析生物技术研究.pdfVIP

中国微生物学会PIII工程专业委员会学术￡论会，止999,下，9，黄山 蛋白质工程与分析生物技术 张先恩 中国科学院武汉病毒研究所，武汉430071 Tel/Fax:02787641792;E.mail:x.zhang9pentium.whiov.ac.cn 目标和策略 分析生物技术是现代生物技术群中一个新的分支，涵盖以分析、诊断与检测和生物信息纵 深获取为目的生物分子高级加工技术，以方法和技术为体现形式，在生命科学研究和相关应用 领域如临床诊断、生物工业过程控制、食品质量评价、药物分析、环境监测、口岸检疫、军事 等具有重要作用。 酶法分析是分析生物技术中主要的内容之一，包括酶试剂盒、酶联免疫 (EL工SA),酶标DNA 探针，酶传感器 (Enzymesensors)等等。分析用酶之所以被广泛应用，归功于酶分子高度特 异性和高催化效率，使微观生物学反应过程得以放大。然而，天然酶蛋白分子并非完美无缺， 例如 “娇嫩”便是它们共有的天然属性。尤其当酶被用来制作生物器件 (如生物芯片、生物传 感器、分子传感器、分子机器等)时，要求具有长期的稳定性。对酶蛋白实施分子改造，具有 广阔的发展空间，我们对以下几个方面的研究方向有较大兴趣: 分子热稳性 · 抗蛋白酶水解 酶催化活性 · 氧还蛋臼的电子转移特性 新的催化特性 · 固定的竺间取向控制 抗抑制剂性能 · 循序催化反应的融合蛋白 蛋白质的分子加工技术包括蛋白质水平和基因水平。蛋白质水平主要指用化学方法对酶进 行化学合成或修饰，其中包括经典的固定化酶方法。化学法盲目性较大，而且作用剧烈，酶的 回收活力低。 基因水平修饰是通过 DNA分子操纵改变蛋白质一级结构，从而改变蛋白质的功能。若千年 以来，通过采用 X衍射和NMR等技术对蛋白质分子结构的研究获得了大量的信息，酶的结构与 功能得以在分子水平和超分子水平进行阐迷，为蛋白质工程设计提供了依据，使人们比较有信 心地朝着一个既定目标，进行分子设计 或分子修饰来定向加工或制造酶蛋白 〔习。图1表示蛋 白质工程的设计过程。 开发 图1 蛋白质工程设计过程 中国微生物学会酶工程专业委员会学术讨论会，1999,7,9,黄山 实验技术 蛋白质工程可以采用定位突变 (Sitedirectedmutagenesis)和随机突变 (Random mutagenesis)。前者需要知道蛋白质一级结构和编码基因序列，可以根据蛋白质空间结构知识 来设计定位突变，通过核昔酸的置换、插入或删除来进行。随机突变又称非定点突变，己经被 采用了许多年。在尚不知道蛋白质空间结构，或者根据现有的蛋白质结构知识尚不能进行有效 的在定点突变时，非定点突变仍然不失其重要意义。传统的非定点突变采用化学诱变和物理法， 可以在基因组中广泛地制造多点突变，突变的位置完全是随机的。近年出现的随机搅乱重组((DNA Shuffling)技术，能够在单个基因内部成功地制造多点突变。 蛋白质的基因操纵的新近主流技术包括聚合酶链式反应 (PCR)介导的基因点突变(如 over-lapextension[2])，噬菌体展示 (Phagedisplay),DNAShuffling(暂译 “随机搅乱重 组”)，融合蛋白工程，等等。图2给出Overlap-extensionPCR介导的点突变原理。 ---一_______一压 ‘ 尹--一______二 B— .- ，亩，一 ) Introduction of mismatch and plifcationofADandBCfragments. — 一 -