泽黄颗粒及其拆方对糖尿病大鼠肾脏AQP1 表达的调节效应.docVIP

精品论文 参考文献 泽黄颗粒及其拆方对糖尿病大鼠肾脏AQP1 表达的调节效应 　1.陕西中医学院 陕西咸阳 712046； 　　2.第四军医大学西京医院 陕西西安 710032； 　　3.第四军医大学西京医院 陕西西安 710032； 　　4.第四军医大学西京医院 陕西西安 710032； 　　5.第四军医大学生理学教研室 陕西西安 710032； 　　【摘 要】目的：探讨肾脏水通道蛋白1（AQP1）的表达与糖尿病肾病大鼠水液代谢异常和泽黄颗粒及其拆方防治作用的机制。方法：用高糖高脂饲料加低剂量链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型，随机分为模型组、西药对照组、泽黄颗粒组、拆方组，另设正常组。于实验第12周末检测BG、TG、TC、BUN、HbA1c、Scr及UAER指标；运用Western-blot方法检测AQP1在各组大鼠肾脏中蛋白的表达水平。结果：与模型组相比，泽黄颗粒组和西药对照组大鼠BG、TG、HbA1c水平均明显下降（Plt;0.01）；与西药对照组相比，泽黄颗粒组和拆方组大鼠TC、Scr、BUN、UAER水平明显下降（Plt;0.05）。与模型组相比，泽黄颗粒组及拆方组大鼠肾脏AQP1蛋白表达明显升高。结论：泽黄颗粒及其拆方对AQP1的表达均有上调作用，这可能是其调节水液代谢的机制，也是其防治糖尿病肾病的基础。 　　【关键词】糖尿病；糖尿病肾病；水通道蛋白1；泽黄颗粒 　　【中图分类号】R587.2 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）6-0026-02 　　糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病（diabetes mellitus，DM）严重的微血管并发症，已成为DM患者的主要死因之一。DN的病理特点是早期肾脏高灌注，导致肾小球滤过率增高，肾小球基底膜（GBM）增厚，晚期出现肾小球结节样硬化，同时伴有肾间质和肾小管的病变。水液代谢紊乱将导致糖尿病性微血管病变的发展。中医药疗法在防治DN的过程中具有独特的优势。本研究观察泽黄颗粒及其拆方对高糖高脂饲料加STZ诱导的DM大鼠肾脏AQP1蛋白水平的表达、BG、HbA1c、UAER等指标的变化，旨在探讨AQP1的表达改变与DN水液代谢异常的关系以及泽黄颗粒及其拆方的药理效应，为DN的防治及泽黄颗粒临床应用提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1动物SD大鼠，雄性，5周龄，SPF级，共60只，体重为170～210g，第四军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（军）2002005。 　　1.1.2药物盐酸二甲双胍片，中美上海施贵宝制药有限公司；泽黄颗粒由黄芪、山药、丹参等药物组成，活血利水组份由丹参、泽兰等药物组成，均为颗粒制剂，由第四军医大学天然药物研究所提供。 　　1.1.3试剂与仪器链脲佐菌素（STZ）、胆固醇、胆酸钠，美国Sigma公司；兔抗大鼠AQP1，武汉博士德生物工程有限公司；辣根酶标记山羊抗兔IgG，康为世纪；DAB显色试剂盒，康为世纪；Image-Pro Plus6.0专业图像分析软件，美国Media Cybernetics。 　　1.2方法 　　1.2.1造模、分组及用药将大鼠按体重随机分成两组：正常组10只，DM模型组50只。正常组喂食普通饲料；DM模型组喂食高糖高脂饲料，在高糖高脂饲料喂养4周后，以40mg/kg体重一次性空腹腹腔注射STZ（溶于0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液，PH4.4），72h后监测血糖，以连续3次空腹血糖ge;16.7mmol/L，尿糖阳性，尿微量白蛋白定性测量阳性者确定为DM模型制备成功。大鼠造模成功39只，随机分为模型组10只、西药对照组10只、泽黄颗粒组10只、拆方组9只。该模型具有中度高血糖、高血脂、胰岛素抵抗以及典型的DN改变等特点[1]。正常组用等量枸橼酸盐缓冲液腹腔注射。 　　西药对照组以盐酸二甲双胍片0.5g?kg-1?d-1灌胃，泽黄颗粒组以泽黄颗粒4.23g?kg-1?d-1灌胃，拆方组以活血利水组份1.08 g?kg-1?d-1灌胃，正常组、模型组大鼠以等量生理盐水灌胃。实验期间，各组大鼠自由饮水。 　　1.2.2标本采集各组大鼠于实验第12周末置代谢笼内收集24h尿液，检测尿量、尿白蛋白；再将大鼠麻醉后心脏取血,检测BG、Scr、BUN、HbA1c、TG及TC指标。采集肾脏标本放入液氮冻存，以备行Western-blot检测。 　　1.2.3生化指标检测BG、TG、TC、BUN、HbA1c、Scr采用全自动生化分析仪测定，尿白蛋白采用化学发光法于全自动蛋白分析系统测定，根据尿量计算UAER。 　　1.2.4 AQP1 Western-blot检测用裂解液提取组织总蛋白，按BCA蛋白定量试剂