细胞工程-3讲第2节-动物人工繁殖.pptxVIP

第2节 核移植动物 1896 1920 1987 2006 2012年诺贝尔生理学或医学奖 英国发育生物学家约翰·格登 1933年10月2日生。英国发育生物学家。主要以 在细胞核移植与克隆方面的先驱性研究而知名。 1958年，约翰·格登在牛津 大学成功做出了体细胞克隆 蛙。他将一个青蛙卵细胞内 未成熟的细胞核替换为成熟 肠细胞的细胞核，发育成为 一只正常的蝌蚪。 “克隆” 早在20世纪初期 就已经被提出，但最初仅用 于植物研究上。直到1963年 ，这一词汇才首次被用在动 物研究领域，正是为了描述 格登的蛙类克隆成果。 一 定义 细胞核移植（Cell nuclear transfer）是一种利用显微操 作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成 熟卵细胞内的技术。主要包括胚胎细胞核移植和体细胞核 移植。 细胞核移植动物：是用特定发育阶段的核供体及相应的核 受体（去核的卵子）体外构建重组胚，通过胚胎移植达到 受体，发育出生的动物——克隆动物（核质杂种）。 1－1952年，Briggs和King成功地在豹蛙上获得了胚胎 细胞核移植后代。 2- 1958年，约翰·格登在牛津大学成功做出了体细胞 克隆蛙。 3－1980年，中国将鲫鱼胚胎细胞移入鲤鱼去核的未受 精卵中实现了不同种间的核质杂交，成功地无性繁殖了 “鲤鲫核鱼”新品种。 二 克隆动物的发展历史 中国“克隆之父”——童第周 卓越的实验胚胎学家，中国实验胚胎学的主要奠基人 。 提出了核质关系理论：不仅仅是细胞核来决定细胞质 发育方向，细胞质也决定细胞核的命运，核与质之间 有非常密切的关系。 童鱼：鲫鱼卵的核酸注入了金鱼受精卵的细胞质内， 在发育成长的320条幼鱼中，有106条由双尾变成了单 尾，金鱼表现出鲫鱼的尾鳍性状。说明不只是细胞核 控制生物的遗传性状，细胞质也起着非常重要的作用 。 童第周主持撰写的论文《鲤鱼细胞核和鲫鱼细胞质 配合而成的核质杂种鱼》，以中英文发表在1980年 第4期出版的《中国科学》上，论文报道了中国成功 获得具有“发育全能性”克隆鱼的消息。这是世界 上报道的第一例发育成熟的异种间的胚胎细胞克隆 动物。 1981年，中科院水生生物研究所将成年三倍体鲫鱼 的肾脏细胞核移植到二倍体鲫鱼去核的卵子中，获 得了三倍体的克隆鱼，并发育成成体，证明成年鱼 的体细胞也可以去分化和再程序化，具有发育成个 体的全能性。研究论文发表在1986年的《水生学报 》上。   4-1984年，丹麦科学家斯丁·维拉德森 成功利用胚胎细胞克隆出一只绵羊，这 是首次证实的通过核移植技术克隆哺乳 动物。证明胚胎细胞具有全能性。 5－1997年，英格兰爱丁堡罗斯林研究 所和PPL制药公司利用高度分化的绵羊 乳腺上皮细胞，通过核移植克隆了一只 雌性小绵羊——多莉。这是第一个体细 胞克隆动物。证明成熟的体细胞也具有 全能性。       体细胞克隆：是将动物体细胞经过抑制培养使其处于休眠 状态，利用细胞核移植技术将其导入去核卵母细胞，培育 成早期胚胎，将胚胎移植至受体，妊娠产仔培育出与核供 体一样的成体动物的一种细胞工程技术。 A-理论价值： 高度分化的体细胞具有全能性 B-实践意义： 由于体细胞数量丰富并且易于获得，因此体细胞克隆动物 技术在加快珍稀动物繁殖，抢救濒危动物（如大熊猫）方 面意义重大。 可以用患者本人细胞培育出新组织。 2000年猕猴特拉 2000年 老鼠“库姆利纳” 1998年母牛诺托和卡加 20世纪60年代开始，科学家已经成功克隆20多种动物 2001年 2003年 2005年史努比 三 技术流程 1-核供体细胞的准备 2-受体细胞的去核 3-细胞核移植、激活 4-重组胚的培养与移植 5-核移植后代的鉴定    1核供体细胞获得与取核 供核细胞可以是动物原代细胞或传代细胞。分离 制备单个动物细胞，体外培养得到正常二倍体体 细胞系，然后进行1～5 天的缺血饥饿培养，诱 使细胞处于“静止”状态（一般进入G0/G1 期） 。 采用细胞松弛素B（Cytochalasin B）诱发细胞 排核或者显微操作取核等方法得到细胞核。     2受体细胞去核 （1）用微细玻璃管吸除第一极体及处于分裂中 期的染色体和周围的部分细胞质。 （2）用荧光染料Hoechst33342对卵细胞DNA进行 染色，在紫外观察下去核可提高去核成功率。 （3）使用Hoechst33342与卵细胞DNA结合后，用 紫外线定点照射使核功能丧失。     3 细胞核移植 细胞核移植可以采用胞质内注射和透明带下注射 方法。 前者是用微吸管吸取供体核后，直接注射进卵子 细胞质。 后者是把细胞核注射进透明带和卵细胞间的卵周 隙中。    在细胞核移植时，供体