诱导人脐带MSCs分化为胰岛样细胞团的促成熟方案及机制研究.pdfVIP

· 294 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：294．301 [文章编号】 1000—4718(2013)02—0294—08 诱导人脐带MSCs分化为胰岛样细胞团的 促成熟方案及机制术 苏仲春， 陈家劲， 王 圳， 陈志明， 王跃春 (暨南大学医学院生理学系，广东 广州 510632) [摘 要] 目的：通过各种生物化学制剂的不同组合在体外诱导人脐带间充质干细胞 (hUC．MSCs)向胰岛样 细胞团(ILCs)分化，筛选出能表达激素原转化酶 (PC)1和PC2的促成熟方案。方法：用胶原酶 Ⅱ消化 、过滤离心 和不完全消化传代的方法从人的完整脐带中分离和纯化hUC—MSCs，流式细胞术、RT—PCR和免疫细胞荧光技术检 测其干细胞标志物。选用 A、B、C3种方案诱导hUC-MSCs向ILCs分化 ：方案A为含 1O g／L碱性成纤维细胞生长 因子 (bFGF)、10tLg／L表皮生长因子 (EGF)、10mg／L银杏提取液 (GBE)及2％胎牛血清(FCS)的高糖培养基 IM— DM；在方案A基础上加入 10 g／L尼克酰胺为方案B；在方案 B基础上加入 10 g／L肝细胞生长因子 (HGF)为方 案C。在hUC—MSCs诱导前后，通过倒置显微镜观察其形态变化，采用 RT—PCR、qPCR和Westernblotting检测胰岛 相关mRNA和蛋白，特别是PC1和 PC2的表达情况。结果：(1)细胞形态、表面相关抗原 、干细胞特异基因的表达 等情况表明hUC—MSCs可以从人脐带中被成功地分离和纯化；hUC—MSCs普遍表达 nestin，轻微表达 Isll。(2)RT． PCR检测发现方案A诱导的ILCs有Glut一2和MafAmRNA表达，方案B诱导的ILCs有Glut．2、MafA、Nkx6．1和PC2 mRNA表达，方案C诱导的ILCs有Glut一2、MafA、Nkx6．1、PC2、Ngn3、Pdxl、PC1和胰岛素mRNA表达，提示A、B和C 3种方案诱导的细胞有逐渐成熟的趋势。qPCR检测也证实了PC1mRNA仅在方案C中有表达，PC2mRNA在方案 B和方案 C中均有表达，但方案C中PC2mRNA的表达量显著高于方案B(P0．o1)；Westernblotting结果也表明 PC1蛋白只在方案 C中有表达；PC2酶原(ProPC2)与PC2在方案B和方案 C中都有表达，且它们在方案C中的表 达量均显著高于方案B(P0．01)。结论：(1)hUC—MSCs具有向胰岛祖细胞或胰岛细胞分化的潜能；(2)方案C中 尼克酰胺和HGF可促进 hUC．MSCs向ILCs分化，使 ILCs表达 PC1并上调PC2；相对于方案 A和B，方案C是一种 促成熟方案。 [关键词] 脐带；问充质干细胞 ；激素原转化酶；胰岛样细胞团 [中图分类号] R329 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．02．019 M aturity—promotingprotocolsandmechanismsdirectingdifferentiationof humanumbilicalcord．derivedM SCStowardsislet．1ikeclusters SUZhong—chun，CHENJia-jing，WANGZhen，CHENZhi-ming，WANGYue—chun (DepartmentofPhysiology，SchoolofMedicine，JinanUniversity，Guangzhou510632，China．E—mail：monkeymei2@ya— hoo．con．cn) [ABSTRACT] AIM：Todeterminethematurity—promotingprotocolsfordirectingthedifferentiationofhumanam— bilicalcord-derivedmesenehymalstemcells(hUC—MSCs)