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292园艺学进展(第七辑
芦笋AFLP技术体系的建立与优化
韩莹琰范双喜。付婕
(北京农学院植科系，北京102206)
摘要：以本课题组自行培育的芦笋品种A，o为试材，通过对反应体系中的几个关键因素
进行优化，建立了适宜芦笋的AFLP体系。结果表明：酶切基因组适宜用量为400
500ng；
酶切一连接采用一步法；预扩增时退火温度降低5C；预扩增产物适宜稀释倍数为20倍。
关键词：芦笋}AFLP；影响因素
es—
Abstract：An was
AFLP(amplifiedfragmentlengthpolymorphism)analysissystem
tablished埘th whichwerebredourresearch factorofthe
A10 by by
Asparagus groupoptimizing
AFLP Theresultshowedthatthe of DNAshouldbe
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and shouldbedoneone the of
400—500ng；thedigestionligation step，andproductspream-
shouldbedilutedtO20times．
plification
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Keyword：asparagus；AFLPsystem；influencing
AFLP(amplifiedfragment
length
士提出并完善的叫。现已广泛应用于生物多样性，指纹图谱的构建，遗传图谱的构建，基因克隆等诸多
var．aitilis
officinalis L．)为世界十大名菜之一，利用AFLP技术进
研究领域‘“。芦笋(Asparagus
行芦笋基因组的相关研究在国内还未见报道。因此，本研究旨在建立一套适于芦笋的AFLP技术体系，
体系的建立对于进一步深入开展芦笋分子生物学研究具有重要意义。
1材料与方法
1．1材料
本课题组自行培育的芦笋品种At。，于春季采其幼嫩拟叶作为试验材料。
1．2试剂和仪器
9
System700型，电泳仪为北京市六一仪器厂生产的DYY—IOC型垂直电泳系统。
1．3方法
1．3．I基因组DNA的提取采用程丽莉等o]的方法并加以改进。用0．8％的琼脂糖凝胶检测
DNA的浓度和分子量。
响实验结果的关键因素进行了优化。
收稿日期：2005—12—21；修回日期：2006—05—12。
蔬菜293
2结果与分析
2．1影响芦笋AFLP体系的关键园素
约50分钟后，在紫外光凝胶成像仪上可见无降解，无RNA污染，样品均匀，条带清晰，可重复性强
(图1)。说明用该法提取的芦笋基因组DNA质量好，完全满足AFLP的要求。
2．1．2酶切一连接条件本试验中采用酶
切一连接一步法，置于室温(约25℃)3～4h。
2．1．3预扩时退火温
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