离子液体-超声协同法提取多花黄精多糖及抗氧化活性研究.docVIP

精品论文 参考文献 离子液体-超声协同法提取多花黄精多糖及抗氧化活性研究 （长沙医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室，中国 湖南 长沙 410219） 摘要：目的 研究多花黄精多糖的离子液体-微波辅助提取最佳工艺及其抗氧化性。方法 以多花黄精多糖含量为指标, 通过单因素和正交试验优化多糖提取工艺；通过检测多花黄精多糖对DPPH自由基和羟自由基的清除能力，研究其抗氧化性。结果 离子液体-超声协同提取多花黄精多糖最佳工艺为：粗制备的黄精粉末加入0.6mol/L的离子液体、提取温度47℃、超声功率220 W、提取20min，提取率为12.31%（n=5）。结论 离子液体-微波辅助提取方法提取多花黄精多糖稳定可行。 关键词：黄精多糖；离子液体-超声辅助提取技术；抗氧化 多花黄精(Polygonatum cyrtonema)隶属于百合科黄精属(Liliaceae)，为多年生草本植物，是一味中国传统的中草药，它也是黄精种类中品质和药效最好的一种[1]。黄精多糖是黄精的有效成分之一，目前，其已知的药理作用包括：抗衰老、降血糖、降血脂、抗肿瘤、提高机体免疫力、抗菌、抗病毒等[2]。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 JH3101电子天平，上海天平仪器厂；SB-3200YDTD超声清洗仪，宁波新芝生物科技股份有限公司，恒温水浴箱，常州市智博瑞仪器有限公司；DZX-DH-50X55-BS电热恒温鼓风干燥箱，上海市跃进医疗器械厂；722N型分光光度计，上海市菁华仪器有限公司；RE-52CS旋转蒸发仪，上海市亚荣生化仪器厂；SHZ-III循环水真空泵，上海市贤德实验仪器有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1 多花黄精多糖提取工艺 1.2.1.1 提取方法在参考文献[4~6]的基础上进行改进将黄精粉碎备用，反复用50mL石油醚和95%乙醇将5g黄精粉末回流洗涤3次，滤渣备干后即为提取原料。将该原料加入一定浓度的离子液体30ml，用超声波仪，在不同温度和功率下，按不同处理时间分别进行提取。将提取液过滤浓缩后，用95%乙醇（约为浓缩液3倍体积）沉淀，过夜后3000rpm离心12min，再分别用乙醇、丙酮、乙醚等将有机溶剂洗涤纯化沉淀，纯化后所得即为多糖。最后用乙醇洗涤3次，用双蒸水溶解待测。 1.2.1.2 黄精多???提取率的计算 用蒽酮-硫酸法进行提取物中总糖含量测定，用DNS法进行提取物中还原糖含量测定。计算公式: A =(T-R)/Mtimes;100% 注:A：提取率(%)；T：总糖量；R：还原糖量；M：材料总量(单位：mg)。 1.2.1.3离子液体的浓度影响 选定超声功率150W，温度40℃，提取时长15min，然后分别按离子液体浓度0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mol/L进行黄精多糖的萃取，观察离子液体浓度的影响。 1.2.1.4提取温度的影响 选定离子液体浓度0.5mol/L，功率150W，提取时长为15min，然后分别在温度30、35、40、45、50℃下进行黄精多糖的提取，观察超声功率的影响。 1.2.1.5提取时长的影响 选定150W的超声波功率，温度40℃，离子液体浓度0.5mol/L，然后提取时长分别为5min、10min、15min、20min、25min，观察提取时长的影响。 1.2.1.6超声功率的影响 选定离子液体浓度0.5mol/L，温度40℃，提取时长为15min，然后分别在超声功率50、100、150、200、250 W下进行黄精多糖的提取，观察超声功率的影响。 1.2.1.7 正交试验 在上述3个单因素试验的基础上，选取该3个因素：离子液体浓度、超声功率、提取时长，设定其他工艺条件不变，进行正交试验，进一步优化提取工艺，祥见表1。 2.3 验证试验 按正交实验所得的提取方案A2B3C2D3进行提取试验，测得多糖平均提取率达12.31%，RSD=2.19%（其中n=5），证实经正交试验优化的最佳提取方案是可行的，结果重复性符合要求，故该方案为离子液体-超声协同法提取黄精多糖的最佳提取工艺。 2.4 黄精多糖抗氧化活性分析 多花黄精多糖对DPPH自由基和羟自由基的清除能力见图2。如图2(a)所示，多花黄精多糖对DPPH自由基的清除率与甘露醇接近，但小于Vc。黄精多糖浓度在20mu;g /mL时，其对DPPH自由基的清除率为10.8%。当黄精多糖浓度增加，其对DPPH自由基的清除率也随之增大。当浓度达到120mu