改良银染法在Hp感染及其他方面的应用.pptVIP

目录 目录 改良银染法在Hp感染及其他方面上的应用 简介 慢性浅表性胃炎、消化性溃疡以及胃癌与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori , Hp)的感染关系密切。早在1998年北京大学第三医院消化科病理室韩亚京老师就在北京医科大学学报上发表文章，标题为“幽门螺杆菌银盐染色方法改进”。 北京大学医学部病理学系王雷明等通过应用改良银染法对不同组织细胞及其中微生物进行染色，取得良好效果。 幽门螺杆菌银盐染色方法改进 研究一 研究背景 因胃镜活检标本病理诊断的需要, 北京大学第三医院消化科病理室自1988 年以来，以Warthin-Starry 银染法为基础加以改进，开展Hp 银盐染色技术。该法改进后的20 余年, 制片数十万张, 至今组织仍着色牢固稳定。 材料 用双蒸水配制0 .06 mol· L-1 AgNO3 水溶液，0 .12 mol·L-1 AgNO3 水溶液，0 .01 mol·L-1对苯二酚水溶液以及20 g·L-1(2%)明胶水银水溶液。 浸银液：0 .06 mol· L-1 AgNO3 水溶液； 显影工作液配制:0 .12 mol·L-1 AgNO3 水溶液、0 .01 mol·L -1对苯二酚水溶液、20 g·L-1(2%)明胶水银水溶液以1∶2∶4(体积比)比例配制（显影工作液使用前现配, 配制5 min 后失效）。 实验前准备 实验用玻璃器皿用前浸入硫酸-重铬酸钾洗液过夜, 双蒸水涮洗, 烤干备用。 讨论 使用此改进法和Warthin-Starry 方法的不同之处主要为试剂配制简便组织着色牢固稳定, 成本低廉。两方法不同之处为: 试剂配制简化, 仅为双蒸水。而W-S 法为醋酸盐缓冲液, 其改良法为柠檬酸盐缓冲液； 所用玻璃器皿、载物片等预先行化学洁净处理, 活性银还原范围局限, 切片银污染程度较小, 观察对比清晰； 本法可使用立式玻璃染缸成批集中染色(每缸8～11 张), 提高制片效率。 讨论 本改进法注意事项如下: 当HE 等常规染色方法显示Hp 疑点而银染切片阴性时, 应更新配制0 .06 mol·L-1AgNO3 水溶液, 并重新切片染色鉴别； 原法为进口明胶,价格较高, 改进法为国产明胶。国产明胶虽产地、生产批次存在一定差异, 但Hp 着色均较为稳定, 仅对载物片污染程度不同, 建议新购明胶使用前应做预实验鉴别； 浸银液反复使用直接影响本方法稳定, 建议500 ml 0 .06 mol·L-1 AgNO3 液累计使用800 张切片为限； 储存时间较长的石蜡包埋标本或其切片置于空气环境较长时间, 使用本法则染色不佳。 韩亚京. 幽门螺杆菌银盐染色方法改进[J]. 北京医科大学学报,1998,05:86. 研究二 改良银染法在病理诊断中的应用 研究背景 银染法作为传统的特殊染色方法仍然是显示病原体、组织及细胞内特殊结构的简便而可靠的方法之一，其原理是利用生物组织成分对银离子还原性质的不同，显示组织及其中微生物的形态。北京大学医学部病理学系王雷明等通过应用改良银染法对组织进行染色，取得良好效果。 材料 银染试剂盒(改良银染法) ，北京世济合力生物科技有限公司提供。 方法 实验前准备： 取15 ml溶剂加入浸银粉缸，将脱蜡到水的石蜡切片( 或固定后的细胞涂片、冷冻切片) 用蒸馏水洗后放入缸中; 再分别取5 ml、10 ml溶剂加入显影粉瓶1、2中。将以上浸银液及显影液共同置于60℃温箱中助溶、浸银(＞30 min) ，完全溶解后取出备用。 方法 实验步骤： 将浸银液缸内的液体全部倒掉，蒸馏水洗2 次(室温下避光) ; 将显影液1 倒入显影液2 中，快速摇匀后置入浸银液缸，显影3 min( 以组织呈现咖啡色为宜); 倒掉浸银液缸中的液体，流水洗2 次; 脱水、透明、封固。 应用 1 检测微生物 1.1 螺旋体 1.2 幽门螺杆菌( HP) 1.3 巴通菌 1.4 放线菌 2 检测异物 3 显示机体组织、细胞 3.1 黑色素颗粒 3.2 神经纤维及髓鞘 3.3 甲状腺滤泡旁细胞 3.4 小胶质细胞和少突胶质细胞 目录 目录