藤茶复方对肝癌Hepa1-6的实验研究.docVIP

精品论文 参考文献 藤茶复方对肝癌Hepa1-6的实验研究 周春权 曾雪爱 　　（福建省中医药研究院 福建 福州 350003） 　　【摘要】 目的：观察藤茶复方在体内外对肝癌Hepa1-6的影响作用。方法：采用皮下接种肝癌HEPA1-6实体瘤模型观察藤茶复方体内的抑瘤作用；应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究藤茶复方对肝癌HEPA1-6细胞体外增殖的影响。结果：藤茶复方对肝癌HEPA1-6有较强的体外增殖抑制作用，且剂量依赖性明显，抑制率随着药物浓度增大而增大，72h半数抑制浓度IC50为49.34mu;g/ml；藤茶复方能抑制肝癌HEPA1-6实体瘤小鼠的肿瘤生长，高、中剂量组抑制率分别为54.3%和48.8%。与模型对照组相比均有显著差异（Plt;0.01）。结论：藤茶复方在体外对肝癌HEPA1-6细胞有明显的抑制作用；在体内对肝癌HEPA1-6肿瘤的生长有明显的抑制作用。 　　【关键词】 藤茶复方；抗肿瘤；HEPA1-6；四甲基偶氮唑蓝 　　【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）26-0195-02 　　藤茶复方主要是由藤茶提取物和肿节风提取物组成，藤茶提取物是从葡萄科蛇葡萄属的显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang)中提取得到，本实验室经超声波提取后其蛇葡萄素含量达80.2%[1]，肿节风提取物是从金粟兰科植物草珊瑚（Sarcandra glabra(Thunb．)Nakai）的干燥全株提取得到，这两种药材均广泛分布于我国长江流域以南的省区，我省有丰富的植物资源[2]。为了更好的利用和开发我省的药物资源，本研究选用藤茶和肿节风的提取物组成复方，在前期的抗肿瘤研究基础上，我们又进行了藤茶复方在体内外对肝癌HEPA1-6抗肿瘤作用的实验研究。现报道如下： 　　1.材料与方法 　　1.1 试验药物 　　藤茶复方：由本实验室分别从藤茶和肿节风药材中超声提取得到提取物，藤茶提取物用高效液相色谱法测定其蛇葡萄素含量达80.2%，肿节风提取物用高效液相色谱法测定其迷迭香酸含量为0.0754%[3]，然后按一定比例混合组成。 　　1.2 动物和菌株 　　C57BL/6j小鼠，雄性 20～22g，清洁级，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证编号：Scxk（泸）2012-0002。 　　瘤株：肝癌细胞Hepa1-6，购自中国科学院上海生命科学院细胞资源中心。用含10%胎牛血清的DMEM（高糖）传代培养。 　　1.3 试剂 　　培养基：DMEM（高糖）、小牛血清（FBS）、 胰酶（含0.02%EDTA）、双抗（青霉素-链霉素）、96孔细胞培养板、细胞培养瓶均为美国Corning公司；磷酸缓冲溶液（PBS），杭州四季青公司；二甲基亚枫（DMSO），Sigma产泰京公司分装；噻唑蓝（MTT），上海生工。 　　1.4 仪器 　　HERACELL 150i型CO2培养箱（美国Thermo Scientific公司）；BCW-1000型生物净化工作台，BW-CJ-1K型空气净化器，（苏州华宏净化技术有限公司）；Multiskan MK3型酶标仪（芬兰Labsystems Dragon公司）；TS100型倒置光学显微镜（日本Nikon公司）； TD5Z型离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）； HHS214型恒温水浴器（上海医疗器械五厂）。WH—Z微型旋涡振荡器（上海泸西分析仪器厂有限公司）；BP211D型电子天平（美国Sartorius公司）；压力蒸汽灭菌器（上海医用核子仪器厂）。 　　1.5 方法 　　1.5.1 MTT法体外抗肿瘤实验 　　取处于对数生长期的肿瘤细胞，用胰酶消化，倒置显微镜下计数，用培养基稀释成细胞悬液,每孔加约1times;104个细胞于96孔板。置37℃、5% CO2的培养箱中培养24h。然后加不同剂量的藤茶复方，37℃、5% CO2的培养箱中培养72h。最后每孔加入含 MTT的不完全培养基，37℃、5% CO2的培养箱中孵育4h,小心弃上清, 加入150ulDMSO, 充分振摇使甲瓒结晶溶解，用酶标仪于492nm波长处测定各孔光吸收值（OD），MTT法中结晶物的形成量与活细胞数和功能状态两者之间成正关系，因此用OD值大小来表示该活细胞数量的多少；并以下式计算细胞生长抑制率： 　　细胞生长抑制率%=（1-OD实验/OD对照）times;100% 　　改良寇氏法计算IC50 　　计算公式为:Log10(IC50)=Xm-i(P-0.5)+i(1-Pm-Pn)/4 　　其中,Xm=Log10(最大剂量)，i=Log10（最大剂量/相临剂