顺铂化疗前后宫颈癌组织中凋亡相关基因表达的分析.docVIP

精品论文 参考文献 顺铂化疗前后宫颈癌组织中凋亡相关基因表达的分析 杨艳青 (哈尔滨市第四医院病理科 150026) 【中图分类号】R737 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）47-0041-03 【摘要】 目的 探讨化疗药物与Bcl-2和Bax表达的关系及其临床意义。方法 采用免疫组织化学S-P法检测60名子宫颈癌病人顺铂联合化疗前后宫颈癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率的差异，用TUNEL法检测化疗前后宫颈癌组织中细胞凋亡阳性率的差异。结果宫颈癌化疗后：组织疗效评定，有效率为（37/60）61.7%；Bcl-2蛋白在化疗前后的表达阳性率分别为53.3%和35.0%，表达差异无显著性（Pgt;0.05）；Bax蛋白在化疗前后的表达阳性率分别为43.3%和73.3%，表达差异有显著性（Plt;0.05）；化疗前后凋亡阳性率分别为33.3%、61.7%，表达差异有显著性（Plt;0.05）；组织学无效、有效的病例在化疗前癌组织中： Bcl-2的阳性率分别为65.2%、45.9%，差异无显著性（Pgt;0.05），Bax的阳性率分别为13.0%、62.2%，差异有显著性（Plt;0.05）。结论　顺铂为主的联合化疗对宫颈癌具有抗癌的功效，并且对宫颈癌细胞具有诱导凋亡的作用，其作用主要通过上调Bax的表达为主。Bax蛋白表达高低有可能成为预测化疗疗效的指标。 【关键词】 细胞凋亡 宫颈癌 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 顺铂 化疗 宫颈癌是最常见的妇科肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤半数以上，其死亡率为妇科恶性肿瘤的首位。近年来，随着肿瘤化学治疗的基础与临床研究的迅速发展，化疗药物的不断开发及给药途径和方法的改进，宫颈癌在化疗方面取得了新进展，针对中晚期及复发性宫颈癌进行的手术前或放疗前化疗已越来越受到国内外有关专家的重视。目前化疗使用的药物还存在不同的看法，临床上还在不断的探索新的化疗药物及新的联合用药方案。 1 材料与方法 1.1临床资料 所有标本均来自本医院存档蜡块（2008年-2011年）。HE切片经镜下病理检查证实为宫颈癌组织，60名病人均具备化疗前后组织共120个样本（化疗前均未进行任何治疗），宫颈癌组织经病理诊断其中鳞癌45例，腺癌15例，宫颈癌的临床分期（FIGO）：Ⅰb期2例，Ⅱb期30例，Ⅱa期7例，Ⅲb期17例，Ⅳ期4例，宫颈癌组织分化程度：低分化16例，中分化32例，高分化3例，中低分化9例，年龄从28-70岁之间，中位年龄49岁。 1.2研究方法 1.2.1试剂： 免疫组织化试剂、TUNEL法原位杂交试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。 1.2.2免疫组化方法：将存档的福尔马林固定、石蜡包埋组织行4mu;m连续切片,作HE染色和S P免疫组化染色，免疫组化S P法严格按照说明书操作步骤进行,DAB显色、苏木精复染、脱水、透明、封片,显微镜下观察用已知阳性切片作阳性对照,以PBS代替一抗作阴性对照,并用高压锅对组织抗原进行修复处理。 1.2.3末端标记技术染色方法及步骤：载玻片防脱片剂APES处理,石蜡切片脱蜡至水,PBS洗。蛋白酶K(20mg?L-1于10mmol?L-1Tris HClpH8.0溶液中),37℃消化30min，PBS洗。0.3%H2O2(体积分数)封闭,室温30min,PBS洗。DAB显色底物5min,显色满意后双蒸水冲洗,停止显色,苏木素衬染。脱水、透明、封片。阳性对照只加标记混合液,不加末端脱氧核苷酸转换酶溶液。 1.2.4化疗方案：均采用顺铂（江苏豪森药业股份有限公司）联合化疗 DDP 50mg/m2，静注，第1天（先水化）；VCR 1mg，静脉冲击疗法，第1天；BLM 20mg/m2，静滴，第1-3天。每3周重复一次，共3个周期。 1.2.5结果判定： 采用半定量判断结果：Bcl-2、Bax阳性定位于癌细胞胞膜和/或胞浆，呈棕黄色颗粒。每例切片任选10个高倍视野观察，计数每高倍视野中阳性细胞的百分比，取其均值。阳性强度分为：无色为0分、淡黄色为1分、黄色为2分、棕黄色为3分，阳性细胞le;10%为0分，10%-30%为1分，30%-50%为2分，gt;50%为3分，两者相乘0分为阴性，1-2分为弱阳性，3-4分为中度阳性，6分以上为强阳性。 TUNEL结果判定标准：鉴于化疗后组织出现片状、灶状坏死，采用凋亡强度进行评判。凋亡细胞阳性定位于胞核，为蓝黑色颗粒。选择凋亡明显的4个区域，在10X低倍镜下数凋亡小体，取其均值。凋亡强度分为三级（强阳、