鸢尾黄素可拮抗鱼藤酮诱导PC12细胞损伤.docVIP

精品论文 参考文献 鸢尾黄素可拮抗鱼藤酮诱导PC12细胞损伤 南华大学附属南华医院神经内科 湖南衡阳 421001 【摘 要】目的：探讨鸢尾黄素对鱼藤酮诱导的PC12细胞氧化应激的保护作用及其可能机制。方法：用鱼藤酮建立PC12细胞损伤模型，给予不同剂量的鸢尾黄素（5和10 mu;mol?L-1）预处理30 min后与鱼藤酮（1 mu;mol?L-1）共同孵育细胞24 h，采用CCK-8法检测细胞存活率，Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡，NBT还原法检测细胞内活性氧类物质（ROS）水平，比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果：与正常对照组相比，鱼藤酮（0.5、1和2 mu;mol?L-1）组细胞存活率都下降（P lt; 0.05），且呈剂量依耐性，而预处理5 mu;mol?L-1和10 mu;mol?L-1鸢尾黄素30 min均可明显减轻1 mu;mol?L-1鱼藤酮对PC12细胞增殖活力的抑制（P lt; 0.05），改善鱼藤酮诱导的PC12细胞核固缩、裂解的现???，明显降低PC12细胞内ROS的含量（P lt; 0.05），明显增加PC12 细胞内SOD的活性（P lt; 0.05）。结论：鸢尾黄素可拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤，其机制可能与清除细胞内ROS，诱导抗氧化酶的活性有关。 【关键词】鸢尾黄素；鱼藤酮；PC12细胞；凋亡；氧化应激 帕金森病（Parkinsons disease，PD）是一种常见的神经退行性疾病，在65岁以上人群发病率达到 1%-3%，流行病学研究显示：环境因素在PD发病中起了重要作[1]。鱼藤酮（Rotenone）是从鱼藤的根部提取的一种天然复合物，被广泛用作杀虫剂和鱼塘、水库清理剂。研究证实鱼藤酮能抑制线粒体复合物I的活性，导致细胞对氧的利用障碍和能量产生不足，从而导致神经元细胞死亡；动物研究也表明鱼藤酮可导致黑质多巴胺能神经元变性，诱发帕金森样症状[2]。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma，PC12）具有神经分泌细胞和神经元的性质，且PC12细胞在含有的酶类、膜受体及合成的递质等方面接近中脑多巴胺神经元，现已成为国内外研究PD的常用细胞模型[3]。鸢尾黄素是一种天然存在的异黄酮类化合物，是中药材射干的有效成分之一，研究证实鸢尾黄素具有抗氧化，抗炎症，抗肿瘤等多种生物活性和药理作用[4]。因此，本研究采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤及氧化应激，探讨鸢尾黄素对其可能的保护作用及其机制。 1.材料与方法 1.1 细胞、试剂及仪器 高分化大鼠PC12细胞购自中山大学医学实验动物中心；鸢尾黄素和鱼藤酮购自Sigma公司；CCK-8检测试剂盒和Hoechst 33258染色液购自碧云天公司；RPMI-1640培养基、马血清、胎牛血清购自Gibco BR公司；活性氧类物质（ROS）检测试剂购自上海杰美基因医药科技有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒购自南京建成科技有限公司。鸢尾黄素用二甲基亚砜（DMSO）溶解配成20 mmol/L的母液，-20 deg;C冻存备用，临用时用完全培养液稀释至所用浓度，是终浓度DMSO的含量小于0.1%；鱼藤酮用DMSO溶解配成2 mmol/L的母液，-20 deg;C冻存备用，临用时用完全培养液稀释至所用浓度，DMSO的含量小于0.1%。主要仪器有：酶联免疫仪（美国Bio-TEK公司），紫外可见分光光度计（日本SHIMADZU公司），荧光显微镜购自日本Olympus公司。 1.2 细胞培养和分组 PC12细胞培养于RPMI1640培养基，内含10%胎牛血清，100 U/mL青霉素，100 U/mL链霉素，置于37 deg;C、5% CO2培养箱中培养，隔天换液，2 d-3 d传代培养，取对数生长期细胞用于实验。实验分组：（1）正常对照组：PC12细胞不加任何药物处理；（2）损伤组：1 mu;mol?L-1鱼藤酮处理PC12细胞24 h；（3）鸢尾黄素预处理组：鸢尾黄素（5和10 mu;mol?L-1）预处理PC12细胞30 min后，再加入1 mu;mol?L-1鱼藤酮共同培养24 h；（4）鸢尾黄素单独处理组：10 mu;mol?L-1鸢尾黄素处理PC12细胞24 h。 1.3 CCK-8检测细胞存活率 细胞以105个/mL接种于96孔板，每孔100 mu;L，每组设置4-6个复孔，待细胞长到60%-70%时，按上述方法加药处理细胞24 h后，每孔加入10 mu;L CCK-8试剂，继续于37 deg;C孵育3 h，酶标仪450 nm测定各孔OD值。细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率（%）=（OD实验-OD空白）/（OD对