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沉默COX-2对HSC-T6细胞趋化因子表达的影响目的:中文摘要研究RNAi 沉默COX-2 对HSC-T6 细胞趋化因子表达的影响。方法:1、将实验分为三组：空白对照组、HK空质粒组、COX-2shRNA1实验组。2、北京博奥生物有限公司的27K Rat GenomeArray芯片扫描观察HK质粒对照组、COX-2 shRNA1转染组不同时间段中HSC-T6 细胞趋化相关因子的差异表达情况；3、Trizol 法提取HSC中的总RNA，采用RT-PCR方法分步验证基因芯片所显示的相关基因差异表达结果。结果：1、荧光显微镜观察显示COX-2 shRNA1 重组质粒转染HSC-T6 细胞株不同时间段，转染效率均在70%以上；2、按Ratio 值≥1.5 和≤0.667 标准,沉默COX-248 小时后，基因芯片扫描显示HSC-T6 细胞中CXCL11、CX3CL1、CXCL10、CCL2 表达均增加；3、按Ratio 值≥1.5 和≤0.667 标准, 沉默COX-272 小时后，基因芯片扫描显示HSC-T6 细胞中CX3CL1、CXCL10 表达增加；4、RT-PCR验证COX-2 shRNA1重组质粒转染HSC-T6细胞72小时后结果，证实CX3CL1 mRNA表达增加，CXCL10 mRNA、CXCL11 mRNA、CCL2mRNA表达减少(p 0.05 )。结论:1、COX-2 shRNA1 沉默COX-2 后HSC-T6 细胞相关的趋化因子基因表达谱发生变化；2、沉默COX-2 不同时间段后HSC-T6 细胞相关趋化因子的表达不尽相同；3、RT-PCR验证显示RNAi 沉默COX-2 72 小时后HSC-T6 细胞趋化因子CX3CL1 mRNA表达增加，CXCL10 mRNA、CXCL11 mRNA、CCL2 mRNA表达减少。2关键词：环氧合酶-2，肝星状细胞，基因芯片，小发夹RNA3EffectofCOX-2smallhairpinRNAonthechemokineexpressioninHSC-T6cellAbstractObjective:To investigate theinfluenceof COX-2 small hairpin RNAon the chemokine expression in HSC-T6 cell.Methods:1、Therearethreegroupsinthesestudy:blankcontrolgroup,emptyvector transfectiongroup,COX-2shRNA1 group.2、The27KRatGenomeArrayfromBeijingCapitalBioCorporationtofindingdifferentexpressedchemokinegenesinemptyvectortransfectionandCOX- 2shRNA1 groupin different time.3、TheextractionandconcentrationoftotalRNAinhepaticstellatecellswereutilizedrespectivelybyTrizol.UsePCRmethodtodetectthedifferentexpression gene from thegenemicroarray.Results:1、Thefluorescencemicroscopeshowthatwecanseegreenfluorescencein HSC-T6cells,cytoplasmindifferenttimebyCOX-2shRNA1transfectedinto HSC-T6 cells, and the transfection efficiencywasabove70%;2、Accordingtothestandardofdifferenceingenechipfluorescenceratioof1.5times (Ratio values ≥1.5 and ≤0.667),the expression of CXCL11、CX3CL1、CXCL10 andCCL2wereincreasedat48hoursbyCOX-2shRNA1transfectedingene microarrayin HSC-T6 cells;3、Accordingtothestandardofdifferenceingenechipfluorescenceratioof1.5times(Ratiovalues≥1.5and≤0.667),theexpressionofCX3CL1andCXCL10were increasedat72hoursb