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RNA 干扰介导的 FOXO3a 基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩摘要目的：探讨慢病毒转染 RNAi 技术介导的 FOXO3a 基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的 疗效。方法：将 40 只 SD 大鼠，随机分为两组，分别为对照组(20 只)和实验组（20 只）。切 断两组大鼠右侧坐骨神经，建立右下趾长伸肌失神经肌萎缩模型。建立模型后于实验 组大鼠失神经趾长伸肌注射 50μL 重组慢病毒载体 Lenti．GFP-FOXO3a；对照组注 射 Lenti．GFP 溶液 50μL，注射后 1、3 周，每个时间点两组大鼠分别取 3 只，完整 切除右侧趾长伸肌，于荧光显微镜下观察绿色荧光信号，每个时间点两组大鼠分别取 6 只，完整切除右侧趾长伸肌，观察肌细胞超微结构，检测肌肉总蛋白含量，测肌肉 湿重维持率，RT-PCR 检测 FOXO3a 基因，检测肌细胞横截面积。结果：转染后 1 和 3 周，两组趾长伸肌中均可观察到大量 GFP 荧光信号。转染后 1 周实验组的肌湿重维持率、肌细胞横截面积、趾长伸肌肌肉总蛋白含量分别为( 90.87± 1.56)％ 、(937.63．42±17．63)μ㎡和 ( 93.20±1.33)(mg／mL)均明显高于对照组 (77.73±2.21)%、(721．50±14．40)μ㎡和 ( 74.74±1.45)(mg／mL)，差异均有统计学意义 ( P 均0．0 1 )。RT-PCR 检测实验组 FOXO3a 基因与对照组相比明显下调（P0.01）。转染后 3 周，上述各指标分别为（86.69±1.31）%、（843.10±16．44） μ㎡和（80.39±2.34)(mg／mL)，仍高于对照组，对照组各指标为 （53.42±2.01）%、（633.90±12.90）μ㎡和（65.22±2.72)(mg／mL)（P 均0.01）。超微结构显示，术 后 1 周和 3 周，对照组肌细胞相对于实验组出现少量线粒体明显空泡化，Z 线紊乱，肌丝排列不整齐。结论：FOXO3a 基因 siRNA 重组慢病毒在大鼠体内有较高的转染率，可有效抑制 FOXO3a 基因的表达。RNAi 介导的 FOXO3a 基因下调可在大鼠失神经早期可以延缓失神经骨 骼肌的萎缩。关键词：肌萎缩；FOXO3a；去神经支配；RNA 干扰；重组慢病毒Delaying of denervated muscle atrophy in rat by means of gene downregulation 0fFOXO3a by RNAiAbstractObjective:To Explore the effect of delaying atrophy of rat denervted skeletal muscles by RNAi- mediated gene downregulation 0f FOXO3a.Methods:Fourty SD rats were randomly divided control group and experimental group．Models of extensor digitorum longus muscle denervation atrophy were established at the right lower limb by cutting sciatic nerve ． Denervated extensor digitorum longus muscles of experimental groups were administered with 50 μ L of recombinant lentivirs vector carrying FOXO3a . 50μL lenti—GFP solution was administered into Denervated extensor digitorum longus muscles of control groups ．One and 3 weeks after the transfection，the right intact extensor digitorum longus muscles of 3 rats of each group and timepoint were excised to observe green fluorescent under fluorescent microscope. The right intact extensor digitorum longus muscles of 6 rats of each group and timepoint were excised to observe ul