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rna干扰介导foxo3a基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩word论文
RNA 干扰介导的 FOXO3a 基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩摘要目的:探讨慢病毒转染 RNAi 技术介导的 FOXO3a 基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的 疗效。方法:将 40 只 SD 大鼠,随机分为两组,分别为对照组(20 只)和实验组(20 只)。切 断两组大鼠右侧坐骨神经,建立右下趾长伸肌失神经肌萎缩模型。建立模型后于实验 组大鼠失神经趾长伸肌注射 50μL 重组慢病毒载体 Lenti.GFP-FOXO3a;对照组注 射 Lenti.GFP 溶液 50μL,注射后 1、3 周,每个时间点两组大鼠分别取 3 只,完整 切除右侧趾长伸肌,于荧光显微镜下观察绿色荧光信号,每个时间点两组大鼠分别取 6 只,完整切除右侧趾长伸肌,观察肌细胞超微结构,检测肌肉总蛋白含量,测肌肉 湿重维持率,RT-PCR 检测 FOXO3a 基因,检测肌细胞横截面积。结果:转染后 1 和 3 周,两组趾长伸肌中均可观察到大量 GFP 荧光信号。转染后 1 周实验组的肌湿重维持率、肌细胞横截面积、趾长伸肌肌肉总蛋白含量分别为( 90.87± 1.56)% 、(937.63.42±17.63)μ㎡和 ( 93.20±1.33)(mg/mL)均明显高于对照组 (77.73±2.21)%、(721.50±14.40)μ㎡和 ( 74.74±1.45)(mg/mL),差异均有统计学意义 ( P 均0.0 1 )。RT-PCR 检测实验组 FOXO3a 基因与对照组相比明显下调(P0.01)。转染后 3 周,上述各指标分别为(86.69±1.31)%、(843.10±16.44) μ㎡和(80.39±2.34)(mg/mL),仍高于对照组,对照组各指标为 (53.42±2.01)%、(633.90±12.90)μ㎡和(65.22±2.72)(mg/mL)(P 均0.01)。超微结构显示,术 后 1 周和 3 周,对照组肌细胞相对于实验组出现少量线粒体明显空泡化,Z 线紊乱,肌丝排列不整齐。结论:FOXO3a 基因 siRNA 重组慢病毒在大鼠体内有较高的转染率,可有效抑制 FOXO3a 基因的表达。RNAi 介导的 FOXO3a 基因下调可在大鼠失神经早期可以延缓失神经骨 骼肌的萎缩。关键词:肌萎缩;FOXO3a;去神经支配;RNA 干扰;重组慢病毒Delaying of denervated muscle atrophy in rat by means of gene downregulation 0fFOXO3a by RNAiAbstractObjective:To Explore the effect of delaying atrophy of rat denervted skeletal muscles by RNAi- mediated gene downregulation 0f FOXO3a.Methods:Fourty SD rats were randomly divided control group and experimental group.Models of extensor digitorum longus muscle denervation atrophy were established at the right lower limb by cutting sciatic nerve . Denervated extensor digitorum longus muscles of experimental groups were administered with 50 μ L of recombinant lentivirs vector carrying FOXO3a . 50μL lenti—GFP solution was administered into Denervated extensor digitorum longus muscles of control groups .One and 3 weeks after the transfection,the right intact extensor digitorum longus muscles of 3 rats of each group and timepoint were excised to observe green fluorescent under fluorescent microscope. The right intact extensor digitorum longus muscles of 6 rats of each group and timepoint were excised to observe ul
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