酵母菌的形态观察、细菌革兰氏染色法.ppt

实验五 （一）、酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别（二）、革兰氏染色 （一）、酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别 一、目的要求 1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式 2、学习掌握区分酵母死、活细胞的染色方法 二、基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 本实验是通过美蓝染色制成水浸片，和水-碘浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞具有较强的还原能力，使美蓝变为无色的还原型，所以活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原力或还原力极弱，而染成蓝色或淡蓝色。 因此，美蓝浸片可观察酵母形态，还可区分死、活细胞，但其浓度、作用时间等均有影响，应加注意。 三、器材： 酿酒酵母 四、操作步骤 1、美蓝浸片观察 （1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏美蓝液，按无菌操作取酿酒酵母少许，放在染液中，使菌体与染液混匀。 （2）盖玻片盖在液滴上。 （3）水浸片置3分钟后镜检。低倍-高倍，观察形态和出芽情况。 （4）染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 （5）用0.05%吕氏碱性美蓝液重复上述操作。 2、水-碘浸片观察 载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘液，加滴3滴水，取酵酒酵母少许，放在水-碘液中，混匀，盖上盖玻片，镜检。 五、实验报告 1、绘出观察到的酵母菌形态特征。 2、说明观察到的吕氏碱性美蓝液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。 （二）、革兰氏染色法 一、 目的要求 1、学习并掌握细菌的革兰氏染色法。 2、理解革兰氏染色法的原理。 细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式。 常用碱性染料进行简单染色 二、基本原理： 革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂肪含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，蕃红复染后呈红色。 染色原理 菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 染色剂：革兰氏染色液 仪器与用具：显微镜，酒精灯，载玻片，接种环等 三、器材 四、操作步骤 1、制片：涂片,然后干燥、固定。 、初染：滴加结晶紫染色1-2min ，后用水冲洗。 、媒染：滴加碘液染色1min ，后用水冲洗，甩尽残余水 、脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度），然后立即用水冲洗。 、复染：用蕃红覆盖涂片进行复染，染3－5min，如果石炭酸复红染1min。水洗，晾干。 、镜检：先用低倍镜观察，后用高倍镜观察 、混合涂片染色：在同一个载玻片上将两种菌混合涂片、染色、镜检比较。 阳性菌 阴性菌 说明你的染色结果，各菌的形状、颜色和革兰氏染色反应 思考题： （1）哪些环节会影响染色结果的正确性？你认为最关键环节是什么？ （2）用老龄细菌染色会出现什么结果？ （3）革兰氏染色哪个步骤可以省去而不影响结果？ 下周实验：微生物大小的测定 五、实验报告