2011年高考生物一轮复习课件：第一部分 无菌操作技术实践(苏教)PPT.ppt

选修1 生物技术实践 第一部分 无菌操作技术实践 高频考点突破 考点一 无菌技术 1.无菌技术具体操作 (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的实验用具和培养基等进 行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作 应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具 与周围的物品相接触。;2.消毒和灭菌的区别;特别提醒 酒精消毒时，体积分数为70％的酒精杀菌效果最 好，原因是浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固 成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过 低，杀菌力减弱。;对位训练 1.（2008·江苏生物，25）某组织培养实验室的愈 伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了 4个实验，实验条件除图示外其他均相同。下列 各图表示实验结果，据图可得出的初步结论是 （多选） ( );A.污染主要不是培养基灭菌时间短造成的 B.污染主要来源于组织培养所用的离体组织 C.调节培养基pH不能解决污染问题 D.调节培养温度不能解决污染问题 解析 由（a）、（c）、（d）曲线较为平缓可知， 灭菌时间、pH、温度等对污染率影响不大；离体组 织的灭菌时间与污染率呈反相关关系，影响较大。 答案 ABCD;考点二 大肠杆菌的培养和分离 1.大肠杆菌 (1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2.培养：实验中用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。;3.分离(实验部分);4.菌液划线分离的方法;5.保存菌种 用接种环取出单个菌落，用划线法接种在斜面培 养基上，37℃培养24 h后，4℃冰箱保存。 （1）在倒平板过程中，不能将培养基溅在皿壁与 皿盖上，防止杂菌污染。 （2）本实验需设置空白培养基在相同条件下一起 培养，以确定是否有杂菌污染。 （3）培养皿倒置的目的是防止皿盖上的水珠落入 培养基中，造成污染。;对位训练 3.下表是某同学设计的三组培养基： （1）其中B组培养基可培养 ，A组培养 基可能用于培养 ，但在分化阶段必需添 加有关的 。;（2）C组培养基可用于大肠杆菌的培养和分离, 蛋 白胨能提供的营养素有等 ，琼脂的作用为 ，培养基中加入一定量的氯化钠的目 的是 。 （3）以上三种不同的培养基在用于培养之前都必 须进行 操作，而且不同的培养基都必须有 相应的适宜 。 （4）用划线法在LB固体培养基上分离大肠杆菌， 当接种完成后，盖好培养皿盖，将培养皿 ， 放在37℃恒温箱中培养12～24 h，当看到划线末端 出现 时，表明细菌已被分离。;答案 (1)动物细胞 植物离体组织 植物激素 (2)碳源、氮源、生长因子 使培养基凝固 维持一定的渗透压 (3)灭菌 pH (4)倒置 不连续的单个菌落;考点三 微生物培养基的配制 1.培养基的种类 （1）按物理性质分类;（2）按功能分类;2.培养基的配制原则和营养构成 目的要明确：根据微生物的种 类、培养目的 选择不同的原料 配制培养基 营养要协调：配制培养基时要 注意各营养物质 的浓度和比例、 pH要适宜 （2）培养基的营养构成 ①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 水、碳源、氮源和无机盐。 ②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营 养物质以及氧气的要求。;3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 （1）步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 （2）注意事项 ①倒平板的温度一般50℃左右适宜，温度过高会 烫手，过低培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更 好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基， 造成污染。;4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 （1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个 细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个 纯化的细菌菌落。 （2）方法：平板划