支原体、衣原体、立克次体PPT.ppt

致病物质 有两种，其一是内毒素，主要成分为脂多糖(LPS)；其二为磷脂酶A,能损伤宿主细胞膜及溶解胞内吞噬体膜，以利于病原体穿入宿主细胞并在其中生长。 普氏和莫氏立克次体所致的斑疹伤寒症状相似，以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性器官损伤。 (二)微生物特性 1. 比细菌小，呈多形态性，在感染细胞内聚 集成团,分布在胞质内, Gimenez法染色后 呈红色，外表含有微荚膜结构。 2. 必须在真核细胞内才能生长繁殖，培养时 需要C02。通常采用5-9日龄鸡胚作卵黄囊接种，于32℃-35℃孵育4～13d内死亡，鸡胚死亡时间与接种剂量大小呈直接相关。普氏和莫氏立克次体能在多种单层细胞上生长繁殖。豚鼠可作立克次体的初代分离。 3.有群特异性和种特异性两种抗原。大部分立克次体与普通变形杆菌X菌株的菌体耐热多糖抗原有共同的抗原性，故可用这些菌株代替立克次体抗原进行凝集反应去检测抗体，这种交叉凝集试验被称为外斐反应，可供辅助诊断。 外斐反应 立克次体病 变形杆菌 　OX19 变形杆菌 　OX2 变形杆菌 　OXk 流行性斑疹伤寒 ++++ + - 地方性斑疹伤寒 ++++ + - 斑点热 ++++/+ +/+ +++ - 恙虫病 - - ++++ 腺热 - - ++ (三)微生物检验 1.标本采集 (1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症， 在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生 素前采血，立即床侧接种。 (2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心 瓣膜等标本。 2.标本直接检查 (1)免疫荧光检测 用于脏器检查。制备标本片薄而均匀，组织结构清晰，固定后用荧光抗体染色, 常见脾、肺及心瓣膜中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。 (2)核酸检测 PCR敏感性高，所需样品量只需ELISA实验的1／5。以编码17kD蛋白的基因和编码普氏和莫氏立克次体169kD蛋白的基因作为扩增靶区。 引物R17-1、-2在65℃条件下能扩增普氏和莫氏立克次体DNA。在琼脂凝胶上产生一条340bp的核酸带； 引物R169-1、-2仅能扩增普氏立克次体DNA，产生一条432bp的核酸带。两种引物同时使用，扩增后普氏可产生340bp和432bp两条带，而莫氏只产生340bp一条带。 该法敏感性可达0．05ngDNA水平，重复性好，操作方便，对两型立克次体早期、鉴别诊断以及自然生态宿主调查研究具有较大价值。 3．分离培养 (1)动物接种 选用健康雄性豚鼠接种以便观察阴囊肿胀现象。每日测体温，至40℃发热时采血或脏器悬液、接种鸡胚卵黄囊或细胞培养以分离立克次体； 感染莫氏立克次体豚鼠在发热1—2日内出现阴囊红肿，解剖可见腹股沟淋巴结肿大、充血、脾大2-3倍，有腹水；有阴囊反应者，睾丸有小出血点，鞘膜充血并有浆液性渗出物等。鞘膜涂片可查到立克次体。 (2)鉴定 用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵黄囊、细胞培养物中的特异性抗原以已知抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。必要时用补体结合试验、微量凝集试验等，作群和种的鉴定。 (3)分离株繁殖及保存 ①鸡胚卵黄囊培养 收获卵黄囊，经涂片染色镜检, 含立克次体较多而又未发现细菌的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的悬液置-70℃冰箱保存，或冰冻干燥保藏； ②细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、HeLa等细胞，接种培养、鉴定后将立克次体大量繁殖的感染细胞置-70℃储存。 4．抗体检测 立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐 反应、间接免疫荧光(IFA )试验、酶联免 疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合(CF) 试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA) 试验、胶乳凝集(LA)试验等 。 (1)外斐反应 除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性 外，其他为阳性。 患者OX凝集素上升较晚，在病程2周左右方出 现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍 增长，方有诊断意义。 有些病例在病程中效价不见上升，约15％的经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。有些轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其他血清学试验阳性，但外斐反应可为阴性。 斑点热病人外斐反应效价通常为OX19高于OX2，但也有OX2较高者。若仅出现OX2阳性，则对诊断斑点热有特殊意义。 (2)IFA试验 为现在诊断立克次体病常用的方法。用已知 立克次体抗原(感染鸡胚卵黄囊或细胞培养 悬液)制片，以低稀释度的病人血清初筛， 有呈典型立克次体形态的明亮荧光颗粒者， 判为阳性。再将病程早期及晚期血清分别作 双倍或4倍稀释以测效价，如呈4—8倍增长 者可明确诊断。 (3)ELISA 检测IgM抗体对早期诊断有价值。 立克次体抗原吸附于载体。泛影葡胺梯度离心纯