生物化学九三八二九教程教学稿件.ppt

多功能催化作用 酶的活性中心部位，一般都含有多个起催化作用的基团，这些基团在空间有特殊的排列和取向，可以对底物价键的形变和极化及调整底物基团的位置等起到协同作用，从而使底物达到最佳反应状态。 第六节 酶促反应动力学 研究各种因素对酶促反应速度的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 ※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。 一、酶促反应速率的概念 酶促反应速度一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物 的消耗量和产物的生成量来表示 反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以 内）时的反应速度 酶反应速度的测定方法： 1.测量单位时间内底物的消耗量。 2.测量单位时间内产物的生成量。 测定酶反应速度的方法很多：化学滴定法、比色法、比旋光度测定法、气体测压法、紫外吸收法等。 在酶浓度，pH，温度等条件不变的情况下研究底物浓度和反应速度的关系。如右图所示： 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。 [S] V Vmax 随着底物浓度的增高 反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。 [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应 [S] V Vmax 酶反应速度与底物浓度的关系曲线 曲线的基本含义 1.单底物、单产物反应 2.酶促反应速度一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示 3.反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度 4.底物浓度远远大于酶浓度 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速 度的影响呈矩形双曲线关系。 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。 [S]：底物浓度 V ：反应速度 Km — 米氏常数 Vmax — 最大反应速度 三、酶促反应动力学方程式 米－曼氏方程式推导基于两个假设： E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V＝k3[ES]。 (1) S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。 米氏方程的推导 令： 将（4）代入（3），则： [ES]生成速度： ，[ES]分解速度： 即： 则： (1) 经整理得： 由于酶促反应速度由[ES]决定，即 ，所以 (2) 将（2）代入（1）得： (3) 当酶反应体系处于稳态时： 当[Et]=[ES]时， (4) 所以 当反应速度为最大反应速度一半时 Km值的推导 Km＝[S] * Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Km的意义 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Vmax的意义 定义：Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度， 与酶浓度成正比。 意义：Vmax=K3 [E] 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算 酶的转换数，即动力学常数K3。 Lineweaver–Burk的作图法 — 双倒数作图法。 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 取米氏方程式的倒数形式： 1/Vmax 斜率=Km/Vmax -1/Km 3.米氏常数Km的测定 第七节 影响酶促反应速率的因素 1、有些物质能与酶分子上某些必需基团结合（作用),使酶的活性中心的化学性质发生改变，导致酶活力下降或丧失，这种现象称为酶的抑制作用。 2、能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂（inhibitor)。　 3、酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。 b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 区别于酶的变性 抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性 一、抑制剂对酶反应的影响 4、抑制剂的类型 不可逆抑制剂(irreversible inhibition) 抑制剂通常以共价