乙型肝炎病毒核苷（酸）类似物耐药的检测演示文稿.pptVIP

DNA芯片技术 优点 局限性 大通量 技术和设备的要求高 快速 检测成本高 灵敏度高 可平行检测 实时荧光定量PCR在基因变异中的应用 探针定点突变PCR技术Taqman-MGB探针 引物末端碱基定点突变扩增技术 高分辨熔解曲线法 Taqman-MGB探针定点突变PCR技术 Taqman-MGB探针技术检测YMDD变异 HBV DNA105copies/ml W:M=1:1 HBV DNA105copies/ml W:M=10:1 HBV DNA105copies/ml W:M=10:1 ：W ：M 探针定点突变PCR技术 优点 不足 灵敏度高 需要相对较贵的荧光PCR仪 特异性好 需要多条荧光探针，成本高 费时短 影响因素多，存在一定误判 引物末端碱基定点突变扩增技术 引物末端碱基定点突变扩增技术检测YMDD变异 熔解曲线法检测YMDD变异 特异性探针，其Tm值不同 溶解曲线分析 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理 MALDI-TOF MS检测HBV YMDD变异的原理 酶切分子量.JPG 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TOF MS) 优点： 高灵敏度、准确度、分辨率 能发现相对比例小于1%的变异株。 局限性： 设备昂贵，目前国内难以用于临床检测。 HBV耐药不同检测技术的比较 Advances in Molecular Diagnosis of HBV Infection and Drug Resistance。Int. J. Med. Sci. 2005 2(1)：8-16 1Sensitivity here refers to the lowest level (%) at which an assay can detect mixtures of mutant and wild-type virus. 2Information content is considered as a measure of a test’s ability to provide broad, relevant information about possible new mutations. 3Updateability assesses the ease at which a test can be dapted to incorporate the detection of a new mutation. na, not applicable. nd, not determined. HBV表型耐药检测 有两种途径： 1.细胞外HBV聚合酶活性分析。 2.细胞药物敏感性实验。 细胞外HBV聚合酶活性分析 目前常用的研究HBV聚合酶活性模型是将HBV基因组插入杆状病毒载体，继而转染昆虫细胞而表达HBV颗粒，应用亲和层析法纯化HBV颗粒后，在细胞外评价药物对聚合酶活性的影响。 细胞外HBV聚合酶活性分析 细胞药物敏感性实验 该方法类似于细菌药物敏感试验。目前多采用病毒载体将含有被检测的含HBV变异位点的全基因组导入肝细胞源性细胞株，然后将各种浓度的核苷类药物加入培养液，经过一定时间培养后检测细胞上清中的HBV DNA含量。 乙型肝炎病毒核苷(酸)类似物耐药的监测 缪晓辉 2009.5 一、HBV耐药的有关定义 二、各种耐药检测技术的评价 三、需要重视的几个问题 一、HBV耐药的有关定义 病毒学突破（virologic breakthrough） 病毒反跳（viral rebound） 生化学突破（biochemical breakthrough） HBV基因型耐药（genotypic resistance） HBV表型耐药（phenotypic resistance） 临床耐药（clinical resistance） HBV耐药的有关定义 病毒学突破（virologic breakthrough） 指在核苷类药物治疗过程中，患者的血清HBV DNA水平一度被抑制，但在继续治疗中血清HBV DNA水平与最低值相比上升或超过1个log10（10倍）。 HBV耐药的有关定义 病毒反跳（viral rebound） 指核苷类药物治疗过程中患者的血清HBV DNA水平一度被抑制，但在继续治疗中血清HBV DNA升高至＞2×104IU/mL或高于治疗前水平。