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2、电镜技术(EM) 5. 封片:在染色后,重新进入酒精和二甲苯,最后滴加中性树胶,盖上盖玻片,以便长期保存。 ﹡荧光显微镜 (fluorescence microscope) 使用荧光染料染色或作为标记物 以紫外线为光源,激发荧光染料发出不同的荧光。 两种特殊的显微镜 * * * * * * * * * (蚌埠医学院组胚教研室) 实验教学楼E座309 孙美群 The introduction of histology ●是研究机体微细结构(microstructure) 及其相关功能(the related function)的科学。 ●微细结构: 组织学(Histology)概念: 1. 光镜: (light microscope ,LM ) 2. 电镜: (electron microscope,EM) (系统、器官) (组织、细胞、亚细胞、分子) 解剖学 组织学 一、研究内容: 细胞 ( Cell ) 组织 ( Tissue ) 器官 ( Organ ) 系统 ( System ) 1、细 胞 ( Cell ) 1015个细胞 两百多种 是机体结构与功能的基本单位 2、 组 织 (tissue) : 概念:由细胞群和细胞外基质构成。 (cells and extracellular matrix ) 类型: 上皮组织(epithelial tissue) 结缔组织(connective tissue) 肌肉组织(muscular tissue) 神经组织(nervous tissue) ◆是由四大基本组织以不同的种类、 数量和方式组合而成。 3、器 官:(organ) ◆由多个结构相似且 功能相关的器官构成。 4、系 统:(system) 1. 组织学又叫微观解剖学( microanatomy ), 是解剖学知识的进一步完善。 2. 结构是功能的基础,学好组织学是学好 生理学( physiology )的基础。 3. 只有了解正常结构,才能学习其异常变化。 因此组织学是病理学( pathology )的基础。 二、学习组织学的意义: 1、组织学学习内容的侧重点: 2、注意结构与功能的联系: 3、注意平面与立体的关系: 组 织 细 胞 亚 细胞 分 子 三、组织学的学习方法 1、光镜技术 ( light microscope, LM ) 四、组织学的研究技术 2、电镜技术(electron microscopy,EM) 1、光镜技术 ( light microscope, LM ) ◆ 石蜡切片术( paraffin sectioning ) : ●切片( section ): 将组织切薄使光线可以透过。 ●基本程序: 取材、固定: (时间 、大小) 2.脱水和包埋( paraffin embedding ): * 脱水( dehydration ): 用浓度逐渐升高的酒 精 ( 70~100% )将组织中的水完全置换出来。 * 透明( clearing ): 用二甲苯完全置换出酒精。 * 浸蜡( infiltration ): 在60~62℃时,用液态石 蜡完全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固成 固态,内含待切组织。 3.切片: 用切片机将组织切成5~10μm厚 的蜡片,然后将其放到温水上,待其完 全展开后,贴在有粘附剂的载玻片上。 除切片外,还有其他处理组织的方法: 铺片( whole mount ): 用于很薄的组织, 如肠系膜。 磨片( ground section ): 用于很坚硬的组织, 如骨和牙。 涂片( smear ): 用于液态组织, 如血液,骨髓等。 冰冻切片: 4. 染色(Staining): 染料可以将微观结构显示不同的颜色以便观察鉴别。在染色前,需要脱蜡入水,因为染料是水溶性的。 苏木精是碱性染料,可以 使细胞核和核糖体着蓝紫色。 a. 苏木精-伊红染色法 ( HE ) 伊红是酸性染料,可以将 细胞质和细胞外基质染成 红色。 易于被碱性染料着色的性质称嗜碱性 (basophilia) 易于被酸性染料着色的性质称嗜酸性
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