5第五章 抑癌基因 08-10-10.pptVIP

第五章 肿瘤抑制基因 (Tumor suppressor gene, TSG) ?肿瘤抑制基因（抑癌基因） 是细胞生长增殖的负调节因子，能通过抑制细胞过度生长、增殖从而遏制肿瘤形成。 抑癌基因的丢失或失活可能导致肿瘤发生。 第一节 抑癌基因研究的历史 一．抑癌基因存在的证据 1．第一个证据来自Harris的细胞融合实验 2．第二个证据来自Knudson的 “两次突变假说” 3．第三个证据是在肿瘤细胞中发现等位基因的杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH) Harris细胞融合实验 正常细胞和Hela细胞融合杂交 正常细胞 杂交细胞丢失某些染色体后 恢复恶性表型 丢失染色体重新导入肿瘤细胞 正常细胞 实验说明在正常细胞的染色体上存在有抑制细胞恶性表型或阻止肿瘤形成作用的基因。 根据Harris细胞融合实验结果假设，确定一种癌 基因在理论上需符合三个基本条件： 该恶性肿瘤的相应正常组织中该基因必须正常表达。 恶性肿瘤中该基因应有功能失活或结构改变或表达缺陷。 将该基因导入基因异常的细胞内，可部分或全部改变其恶性表型。 杂合性缺失（Loss of heterozygosity，LOH） 杂合性缺失（Loss of heterozygosity，LOH） 杂合性缺失可以用能区分两等位基因的微卫星标记或短串联重复序列 (short tandem repeat, STR)标记来检测。 Loss of heterozygosity (LOH)?for important TSG can be detected by determining LOH in nearby microsatellite markers.?? In Fig 1, microsatellite loci?alleles (STR) are shown as similarly-colored circles along the 17p arms.? If no deletions occur, the ratio of the individual quantity of each of the two alleles at each microsatellite locus is approximately equal (Fig. 1, left and middle panels). Deactivation of P53 requires both genes to be inactivated.???Point mutations in?TSG have no effect on?nearby microsatellites, and cannot be detected by microsatellite LOH studies?(Fig 1, middle panel).?? If, however, one of the gene-inactivating events involves a gross deletion of a chromosome portion, then nearby microsatellite markers will also be deleted (Fig. 1,?right panel), which will cause a gross change in the allelic ratio for the affected microsatellite markers that can be detected by PCR. 长期的细胞遗传学的研究证实，几乎所有的肿瘤细胞都存在染色体片段的非随机性丢失。这意味着这些丢失的片段中必然包含着某些与肿瘤相关的基因，这就是杂合性缺失（loss of heterozygosity）的概念。 所谓杂合性缺失即一个位点上两个多态性的等位基因中的一个出现突变或缺失。杂合性缺失在肿瘤细胞中是一种非常常见的DNA变异。抑癌基因的杂合性缺失会导致肿瘤的发生。利用高度多态性的微卫星DNA标记在同一病人的肿瘤组织和正常组织对某一染色体区域进行扫描，可以找到与杂合性缺失直接相关的标记，再进一步确定这些标记与抑癌基因间的遗传距离。对该区域DNA片段进行候选基因突变分析或直接测序从而确定抑癌基因。 在方法上一般是以PCR扩增微卫星标记的两个等位序列，之后将PCR产物变性以测序胶分析其单链。通过对比两产物单链的浓度比例即可得出这一位点是否存在杂合性缺失。 利用此方法，检测出在肿瘤的发生中，17p和18q存在很高的杂合性缺失频率，分别达70%和75%之多，但杂合性缺失检测DNA的突变为定点检测