人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》课件12共36张PPT.ppt

在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是A A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次 序，降低分离效果 B、气泡阻碍蛋白质的运动 C、气泡与蛋白质发生化学反应 D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密 样品的加入和洗脱的操作不正确的是　A　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A． 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D．用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ A） A．可采集猪血作为实验材料 B．用蒸馏水重复洗涤红细胞 C．血红蛋白释放后应低速短时间离心 D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： （1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。 （2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。 （3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 （4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述正确的是（ ACD ）多 A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 课题3 血红蛋白的提取和分离 思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 一、基础知识： ㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、凝胶： 一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖） 2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法 3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 相对分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( D ) A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 4、具体过程 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B ㈡ 缓冲溶液： 1、作用： 能够抵制（ ） 对溶液的（ ）的影响，维持PH 基本不变。 外界的酸或碱 PH值 2、缓冲溶液的配制 3.为什么在本实验中实用缓冲溶液 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性） ㈢电泳： 1、概念：指带电粒子在电场作用下发 生迁移的过程。 2、原理： 3.分类： 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 测定（ ）通常用 SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳 蛋白质相对分子质量 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 二 实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定 思考 人们用鸡的红细胞提取DNA，用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取， 人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。 选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是 ( ABC )多 A．血红蛋白是有色蛋白 　　 B．红细胞无细胞核 C．红细胞蛋白质含量高 　　 D．红细胞DNA含量高 1.样品处理 血液 血浆 水分 固体物质 血浆蛋白 无机盐 磷脂