泌尿外科解剖与生理精选.ppt

* Till Acker ，et al. A role for hypoxia and hypoxia-inducible transcription factors in tumor physiology。 J Mol Med , 2002, 80:562–575. * 缺氧诱导因子－1（Hypoxia inducible factor 1, HIF-1） HIF-1α 活性调节亚单位 HIF-1β 可能与稳定HIF-1及二聚化有关 2. HIF-1α结构功能代谢及其靶基因 * * * * 缺氧诱导因子1－α的代谢 * 缺氧 癌基因激活 HER2 FRAP HRAS CSRC 抑癌基因失活 VHL PTEN p53 生长因子或细胞因子 IGR、Insulin、EGF、IL-1 HIF-1α的表达调节因素 * 二. 研 究 现 状 1. HIF-1α在肿瘤细胞中表达位于细胞核内. 2.HIF-1α在多种肿瘤中的表达 ,在肿瘤 附近正常组织中不能测及 . 3.在结肠癌、肺癌、乳腺癌及前列腺癌的研究中发现，HIF-1α蛋白表达随乳腺癌恶性度升高而增加，且与浸润、淋巴结转移有关 * 4. 发现HIF-1α-/-组剂量反应曲线较HIF-1α+/+组明显左移,IC50也显著减少. 5.对肿瘤细胞的研究发现HIF-1α-/-肿瘤细胞对放疗和化疗药物的敏感度都有所增加。 6.多药耐药基因MDR1是 HIF-1α的靶基因。 * 7.利用乏氧诱导肺腺癌细胞459表达HIF-1α，发现p-gp和MRP随着HIF-1α表达而增加，并且对表阿霉素和顺铂的耐药性增强。 8.国外的研究也发现，缺氧能导致p-gp和HIF-1α过表达，从而产生对VP-16、博莱霉素和蒽环类耐药。 9.国外对卵巢癌的研究已表明突变型P53过表达会引起HIF-1α表达升高. * 待解决问题 目前关于HIF-1α与胃癌生物行为及多药耐药机制关系的研究报道甚少。 目前对于HIF-1α与ＭＤＲ的研究多用基因转染方法，应用原代胃癌体外细胞药物敏感性进行研究的报道甚少． * 三.研究目标和研究内容 1. 研究目标 研究HIF-1α蛋白表达与p-gp表达的相关性，探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。 探讨HIF-1α表达与胃癌生物学行为的关系 . 探讨HIF-1α蛋白表达与突变P53过表达的相关性 . * 2. 研究内容 １对６０例新鲜胃癌标本进行细胞纯化，短期原代培养，应用流式细胞技术和MTT法检测其对常用化疗药物的敏感性． ２应用免疫组化技术检测60例胃癌石蜡标本P53、P-gp、HIF-1α蛋白表达，并收集临床病理资料。 * ３应用RT-PCR方法检测相同60例新鲜胃癌细胞HIF-1αmRNA的表达水平。 ４应用TUNEL、荧光显微镜等方法检测化疗药诱导胃癌细胞凋亡后的形态学改变。 * 四. 技术路线 HIF-1αRT-PCR 免疫组化 胃癌手术标本 细胞分离、短期培养 ＭＴＴ及流式技术检测化疗药物体外敏感性 HIF-1α、p-gp 、P53 免疫组化 化疗药诱导胃癌细胞凋亡后形态学改变 对结果进行统计分析 * 五. 本课题的特点 从细胞缺氧角度探讨HIF-1α蛋白表达与p-gp表达的相关性，探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。国外有类似研究，国内未见报道 关于HIF-1α表达与胃癌生物学行为的研究国内未见报道。 新颖性 关于胃癌中HIF-1α蛋白表达与P53过表达 关系在国内未见报道 * 实用性 探讨HIF-1α蛋白表达与p-gp表达的相关性， 可望从一新角度阐述耐药发生机制。 研究HIF-1α表达与胃癌生物学行为的 关系，探讨其作为一种新的独立 预后参数的可能性。 探讨HIF-1α蛋白表达与P53过表达关系 有助于更好理解胃癌病理生物学特征。 * 国外已有类似的文献报道。 可行性 手术标本充足 ，设备齐全，预实验结果 科学性 * 免疫组化判断标准： P53:无阳性细胞或阳性细胞 5 %为阴性, ２５％( + ) , ５０％( ２＋ ) ， ７５％强阳性(３＋ ) ，＞７５％为（４＋）。 　P-gp 为胞质和(或) 胞膜阳性,阳性细胞 5 % 为阴性,5 %～15 %为+ , ≥16 %为２＋ 。 HIF-1α判断标准：＜１％为阴性，＜１０％为（＋），１１－５０％为（２＋），＞５０％为（３＋）． * 药物敏感性判断： 高度敏感:抑制率 50 %;中度敏感:抑制率30 %～50 %;不敏感:抑制率 30 %。 * HIF-1α阳性 HIF-1α阴性 p-gp 阳性 p-gp 阴性