第二章 生物制药工艺技术基础精选.ppt

* （二）植物组织和细胞培养所用的培养基 培养基中应含有无机盐、碳源、有机氮源、植物生长激素、维生素等化学成分 （三）培养材料 植物的根、茎、叶、花、果实、种子均可 （四）培养方式 二步法、固定化培养、代谢产物胞外释放、两相培养技术 （五）常用反应器 摇瓶、搅拌型生物反应器、鼓泡塔与气升式反应器、 转鼓式反应器 * 四、酶工程制药技术基础 1.酶工程：酶学与工程力学渗透结合发展形成的生物技术 第一代酶—酶制剂 第二代酶—固定化酶 第三代酶—固定化多酶（包含辅因子再生系统） 2.固定化酶：借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定空间内并具有催化活性的酶制剂 * 3.固定化酶的制备方法 吸附法、包埋法、交联法、共价键结合法 E E E E E E E E E E E E E E E E E E 吸附法 共价结合法 交联法 包埋法 * （1）吸附法 用物理吸附法制成固定化酶，酶活力损失很少，但吸着在载体上的酶，易于脱落，使用价值少。 离子吸附法是将酶与含有离子交换剂的水不溶性载体结合，酶吸附于载体上较为牢固，在工业上用途颇广。 离子吸附法常用的载体有：DEDA-C, ECTEOLA-纤维素，TEAE－纤维素，DEAE－葡聚糖凝胶，Amberlite CG－50 （2）包埋法 包埋法系将酶包埋于凝胶或高分子聚合物网格内，网格可以防止酶的渗出，底物仍能渗入网格内与酶相接触。包埋法的优点是酶分子本身不参与水不溶性网格的形成，许多酶都可用此法固定化。其操作简单，酶分子只是被保埋起来，而未受到化学反应，因此固定化酶表现活力较高。 * 常用的包埋剂有聚丙烯酰胺，卡拉胶，淀粉凝胶，三醋酸纤维素，海藻酸，胶原，血纤维，大豆蛋白等。 （3）共价键结合法 共价键结合法是通过化学反应使酶与聚合物载体共价偶联。酶与载体共价结合的功能团包括氨基，羧基，酚羟基，巯基，羟基，咪唑基。 常用共价键结合法有：重氮化法，烷基化和芳基化法，戊二醛结合反应法，钛螯合法，硫醇－二硫化物的互换反应等 （4）交联法 交联法是使用双功能或多功能试剂与酶分子之间进行分子间的交联反应的固定化方法。由于酶蛋白的功能基团，如氨基，酚基，巯基，和咪唑基，参与交联反应，因此可能影响酶的活性中心结构，而使酶活力显著失活。交联剂有多种，主要为戊二醛。 * 酶工程技术的应用 固定化酶和固定化细胞在食品发酵工业和制药工业方面的应用，不仅可以改革现有的生产工艺，而且可以创新多酶反应工艺，还可以促使发酵工业发生根本性变革，因此在制药工业中的应用具有很大潜力。 * 第四节 生物制药中试放大工艺设计 一、中试放大实验的目的 中试放大是由小试转入工业化生产的过渡性研究工作，对小试工艺能否成功地进入规模生产至关重要。这些研究工作都是围绕如何提高收率，改进操作，提高质量，形成批量生产等方面进行。中试放大是为了验证实验室工艺路线的可行性以及在实验室阶段难以解决或尚未发现的问题。 * 二.进入中试应具备的条件 ①收率稳定，质量可靠 ②操作条件已经确定 ③生物材料的资源已确定并已系统鉴定 ④进行过物料平衡，三废问题已有初步处理方法 ⑤提出中试规模及所需原辅料的规格和数量 ⑥提出安全生产的要求 * 在考查工艺条件的研究阶段中，必须注意和解决： 1.原辅材料规格的过渡试验 在小试时，一般采用的原辅材料规格较高，目的是为了排除原料中所含杂质的不良影响，从而保证实验结果的准确性。但是当工艺路线确定之后，在进一步考察工艺条件时，应尽量改用大规模生产时容易得到的原辅材料。 2.设备选型与材质质量试验 在小试阶段，大部分实验是在小型玻璃仪器中进行，但在工业生产中，物料要接触到各种设备材料，故中试时 要对设备材料的质量及设备的选型进行实验，为工业化生产提供数据 * 3.反应条件限度试验 是为了找到最适宜的工艺条件（如培养基种类，反应温度，压力，pH等），一般均有一个许可范围。进行工艺条件限度试验，全面掌握反应规律。 4.原辅材料、中间体及产品质量分析方法研究 便于制定简便易行、准确可靠的检验方法 5.下游工艺的研究 尽量简化下游工艺操作，采用新工艺，新技术，新设备等以提高劳动生产率，降低成本 *