第三章：愈伤组织培养.pptVIP

第三章： 愈伤组织培养(callus culture) 主要内容: 基本概念 植物材料（外植体）的制备 愈伤组织的诱导与分化 愈伤组织的形态发生 愈伤组织的培养方式 一、基本概念 脱分化(redifferentiation) ： 具有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，细胞改变原来的分化状态，失去原有的结构与功能，转变为具有分生能力的细胞的过程 。 植物离体培养中的脱分化过程 植物离体培养利用特定的条件，促进细胞脱分化，使原已分化并具有一定功能的细胞脱离原轨道，失去其原有状态和功能，而恢复到未分化的愈伤组织状态。 愈伤组织(Callus)： 植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经脱分化等一系列过程，转变为分生细胞，进而转变形成一种能够迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团 一般低，植物各器官、组织都有被诱发产生愈伤组织的潜在可能性。 自然条件下的植物愈伤组织 三、愈伤组织的诱导与分化 一）愈伤组织诱导的操作程序 二）、愈伤组织的诱导 诱导愈伤组织的成败关键主要不是实验材料，而是培养条件，其中激素的成分和浓度是最重要的因素。 1、 常用激素与浓度 三）、影响愈伤组织诱导的因素： 1）、激素： 多数情况下，单独使用2，4-D可以成功诱导愈伤组织的发生 案例1：MS培养基含有不同浓度2，4-D时斑茅幼叶形成愈伤组织的诱导率（%） 不同浓度的2，4-D对愈伤组织的诱导率是不同的。一般情况下，2，4-D的浓度过低（低于10-9mg/L）时，愈伤组织生长缓慢；浓度过高（高于10 mg/L）时，就会抑制愈伤组织的生长。 案例2. 不同培养基及激素浓度对诱导扁桃花药愈伤组织的影响 无论在MS还是在H或B5培养基中，不附加激素2, 4-D均不能诱导扁桃花药愈伤组织的形成， 扁桃花药在H+1.0mg/L 2,4-D的培养基上诱导率最高为47%;在MS+1.0mg/L 2,4-D培养基上诱导率为67.0%;在B5+0.5～1.0mg/L2,4-D，出愈率都在84.0%以上，其中以2,4-D为0.5mg/L时，出愈率高达100%.。说明在扁桃花药诱导过程中，最适基本培养基是B5，最佳 2,4-D浓度为0.5mg/L。 研究表明： 生长素与细胞分裂素对保持愈伤组织的快速生长是必要的，特别是二者搭配使用时更能强烈刺激愈伤组织的形成。 在愈伤组织的诱导时，植物材料不同所用的植物生长调节物质不同，使用的浓度也不同。 2）.培养基 不同的培养基成分对植物不同器官的愈伤组织诱导存在着影响 不同的培养基成分对植物不同器官的愈伤组织诱导存在着影响 二)愈伤组织的形成 愈伤组织从增殖的组织细胞中产生，激素改变细胞的新陈代谢状态，从生长静止期到代谢旺盛。 二)愈伤组织的形成 三个时期愈伤组织的代谢状况、结构以及细胞的平均大小都有明显的差别。 诱导期（Induction,起动期、或起始期）:  起动期： 细胞准备分裂的时期，愈伤组织形成起点。 外植体细胞在完整植株中随着细胞的分化过程而逐渐停止分裂，开始执行它们各自不同的功能。外植体细胞一般处于静止状态，称为静止细胞。 在外源植物激素的作用下，处于静止状态的植物细胞经过复杂的脱分化过程恢复分裂能力转化为分生细胞。此过程有人称之为：细胞的诱导活化过程。 有人认为损伤是诱导细胞分裂的重要因素。受伤细胞释放出的物质与外源激素共同诱导细胞发生分裂，是诱导植物愈伤组织形成的主要原因。 Brown（1972）认为静止细胞是具有分裂能力的，只是被存在的一类抑制物质所阻止，而使其分裂能力不能表现，如果除去抑制物质，就可恢复分裂能力。若加入抵消抑制物质影响的外源物质（激素），细胞就立即进行DNA复制，全部细胞进入S期，并发生同步分裂。 特点： 在诱导期，代谢活化了，细胞内的合成代谢迅速进行，但是细胞的大小仍然和外植体时一样，没有多大改变。 诱导期的长短 由一系列内部（植物的种类、生理状况）和外部（光照、外源激素）因素决定。 例如：菊芋的诱导期有时还不需要1天，胡萝卜则要好几天，而菊芋块茎贮藏时间的改变，诱导期也发生改变。从11月到次年4月取菊芋块茎进行培养，则诱导期从22小时逐渐延长到40小时。 分裂期Cell division)： 分裂期特征： 生理生化上分裂期的一个明显特征是外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞核和核仁