daxx抑制大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖作用及机制word格式论文.docxVIP

DAXX 抑制大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞的增殖的作用及机制硕士研究生：陈洁导师：熊国祚副教授摘要目的：通过观察DAXX对球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖的抑制作用，探讨其发 生机制,为延缓血管狭窄的病理改变提供理论依据。方法：从南华大学动物中心取雄性大鼠（400g±100g）52只，构建颈总动脉球囊 损伤血管狭窄动物模型，运用脂质体局部转染DAXX质粒，随机分为4组：假手 术组、手术组、空转染组、转染组。于术后30分、1小时、2小时、6小时、24小 时取球囊损伤后的大鼠颈总动脉标本，用于免疫组化检测DAXX及JNK的时序 性；于术后7天及14天每组各取4只大鼠颈总动脉标本，HE染色测量内膜中膜比 值观察血管狭窄程度、免疫组化检测抗原蛋白及PCR检测mRNA的表达情况。结果：大鼠颈总动脉球囊损伤后，局部转染DAXX7天及14天后，测PCR及免疫 组化，可知转染组较手术组DAXX表达均明显增加， 表明转染成功。手术后7 天及14天组织切片HE染色显示：手术组较正常组平滑肌细胞增殖明显，管壁增 厚，管腔狭窄，且14天较7天增殖更为明显，手术组与空转染组基本相同；提示 模型构建成功。相较于手术组，转染组平滑肌细胞增殖明显减少，内膜层增厚程 度大为减轻，管腔相对通畅，通过观察内膜/中膜面积的比值发现转染组比手术 组比值明显降低，这就说明DAXX能有效抑制平滑肌细胞增殖、延缓血管狭窄。 另PCR检测DAXX及JNK基因转录，结果显示：与正常组相比，手术组平滑肌细 胞中DAXX及JNK的mRNA显著增多（P小于0.05），提示手术使DAXX及JNK的 mRNA表达上调；而相对于手术组，转染组DAXX及JNK的mRNA表达上调更为 显著（P小于0.05）。同时利用免疫组化方法检测发现：与正常组相比，手术组和 空转染组平滑肌细胞中DAXX及JNK抗原蛋白的表达有所上升，说明血管损伤诱 导DAXX及JNK蛋白表达上调；转染组DAXX及JNK的表达上升更为显著，表明 局部转染后促进DAXX及JNK蛋白的表达。结论 :球囊刺激可诱导平滑肌细胞中 DAXX的表达，并且其表达呈时序性；2DAXX可以抑制血管平滑肌细胞增殖、有效延缓血管狭窄；其抑制作用可能与上调JNK表达、进而诱导平滑肌细胞凋亡途径有关。 关键词: DAXX、JNK、平滑肌细胞、增殖、血管狭窄3DAXX inhibitvascular smooth muscle cellsproliferation andmechanismin balloon-injured rat carotid arteryABSTRACTObjective:The effect of DAXX inhibit smooth muscle cells proliferation in balloon-injured rat carotid artery were investigated,the aim of the present was to study the mechanisms underlying it.thus provide a way to treat vascular stenosis.Methods:52 male rats (400g±100g) were obtained from the Animal Center of theUinversity of South China to built the stonsis model of balloon-injured carotid artery by using liposome topical transfection DAXX plasmid.We randomly dividedthem into 4 groups:sham-surgery group、surgery group、blank-transfected group andtransfected group.We took balloon-injured carotid artery specimens (30min,1h,2h,6h,24h afer the surgery) for Immunohistochemical to determine the time-depentment of DAXX and JNK;4 balloon-injured carotid artery specimens of each groups at 7 days and 14 days were taken for HE to assessment of the degree of vasular restenosis ,for Immunohistochemical to