d半乳糖诱导大鼠内耳氧化性应激 线粒体损伤和凋亡及长期高脂饮食对d半乳糖诱导老化大鼠内耳影响word格式论文.docx

英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称ABRauditory brainstem response听性脑干反应CDcommon deletion常见缺失D-galD-galactoseD-半乳糖HFDhigh-fat diet高脂饮食MDAmalondialdehyde丙二醛mtDNAmitochondrial DNA线粒体 DNANEFAnonesterified fatty acids游离脂肪酸NOXNADPH oxidaseNADPH 氧化酶NOX3NADPH oxidase 3NADPH 氧化酶 3OCorgan of CortiCorti 器OHCouter hair cells外毛细胞8-OHdG8-hydroxy-2-deoxyguanosine8-羟基-2-脱氧鸟苷ROSreactive oxygen species活性氧SGspiral ganglion螺旋神经节SGCspiral ganglion cells螺旋神经节细胞SMCstrial marginal cells血管纹边缘细胞SVstria vascularis血管纹TCtotal cholesterol总胆固醇TEMtransmission electron microscopy透射电子显微镜检术TGtriglycerides甘油三脂T-SODtotal superoxide dismutase总超氧化物歧化酶TUNELterminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick-end-labelling原位末端标记UCPuncoupling protein解偶联蛋白UCP2uncoupling protein 2解偶联蛋白 2UCP3uncoupling protein 3解偶联蛋白 3D-半乳糖诱导大鼠内耳氧化性应激、线粒体损伤和凋亡及长期高脂饮食对 D-半乳糖诱导的老化大鼠内耳的影响华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科博士研究生：杜政德 博士生导师：孔维佳 教授中文摘要第一部分 D-半乳糖诱导大鼠内耳氧化性应激、线粒体损伤和凋亡目的：线粒体 DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）的氧化性损伤和凋亡是老化的重要 特征。我们之前利用连续 8 周注射 D-半乳糖（D-galactose, D-gal）的方法建立了大鼠 老化模型，并且发现在 D-gal 诱导的老化大鼠内耳中氧化性应激的增加和 mtDNA 常 见缺失（common deletion, CD）的增加。但是，在 D-gal 诱导的老化大鼠内耳中，目 前没有直接的证据表明 mtDNA CD 的累积是由氧化性损伤引起的；同时此模型内耳 中活性氧（reactive oxygen species, ROS）的来源以及凋亡情况仍不清楚。 方法：听力正常，无中耳疾患的 40 只 5 周龄雄性 Spragua-Dawley 大鼠随机分成 2 组（各 20 只）：① D-半乳糖组（D-gal group）：每日颈背部皮下注射 D-gal（500mg/kg）， 连续 8 周；②对照组（control group）：每日颈背部皮下注射同体积的生理盐水，连续8 周。听性脑干反应（auditory brainstem response, ABR）检测每组大鼠听功能。比色 法检测大鼠血清 H2O2，总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase, T-SOD）活性 以及丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量。实时定量 PCR 检测大鼠内耳 mtDNA CD 的累积以及 NADPH 氧化酶 3（NOX3）和 P22phox mRNA 水平的变化。透射电子显微 镜检术（Transmission Electron Microscopy, TEM）观察大鼠内耳组织细胞中线粒体超 微 结 构 的 改 变 。 免 疫 组 织 化 学 法 检 测 大 鼠 耳 蜗 8- 羟 基 -2- 脱 氧 鸟 苷（8-hydroxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG）以及 NOX3 和 P22phox 蛋白水平的变化。免疫印迹法检测大鼠内耳组织中激活型 caspase-3（cleaved caspase-3）的表达。原位末端转 移 酶 标 记 （ terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick-end-labelling, TUNEL）染色检测大鼠耳蜗细胞凋亡发生的情 况。结果：D-半乳糖组大鼠血清 H2