临床细菌室厌氧菌培养基本程序张秀珍讲解课件.ppt

4. 细菌耐药质粒的保存： 为了防止细菌耐药质粒的丢失，应尽量减少菌种的传代次数，最好与低温冰箱中保存。在转种带有耐药质粒的细菌时，应选用含有一定量的相应（耐药）抗生素琼脂平板，进行菌种传代。 谢谢！！！ 厌氧菌的鉴定步骤和方法 耐氧试验:3-4次耐氧试验 涂片革兰染色 生物特征:API 20A;Ripid 32; VITEK-32 ANI 色谱分析 分子生物学 直接涂片检查 当有足够的标本或收到两个拭子时，最好在接种前做涂片革兰染色镜检，检查结果可提示需要接种哪些培养基（非常规使用的）。涂片检查可看出有无细菌，微生物的类型和大概的数量以及芽胞、形状和位置（芽胞梭菌）、着色情况及菌体特征。对血性液体或浓稠分泌物用丫啶橙染色比革兰染色较易观察。这些初步结果应该及时向主管医生报告，以帮助他们正确选用抗菌药物。涂片检查可核对培养结果是实验室质量控制的一个重要指标。 厌氧菌鉴定依据 根据菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。最后鉴定是一系列生化及终末代谢产物。 1．形态与染色 仅供参考，因不同培养基，不同菌龄其形态与染色性不同，厌氧培养时间往往较长，因有的G＋变为G－。 2．菌落性状 不同厌氧菌菌落形状和性质不同，梭菌的菌落特点是形状不规则，而无芽胞厌氧菌多呈单个的圆形小菌落。 （1）? 色素：产黑色素普鲁沃菌培养2~10天可产生黑褐色或黑色色素，龋齿放线菌培养3~4天后产生粉红色色素，奈氏放线菌延长培养时间可产生黄褐色色素。 （2）? 溶血：产气荚膜梭菌在新鲜血平板上可形成双溶血圈，但同种的菌不同株则往往产生溶血性的差异，各细菌产生的溶血毒素不同，对不同动物红细胞溶解亦有差异。 （3）? 荧光：产黑色素普鲁沃菌，菌落在紫外线照射下，发出砖红色荧光，梭杆菌常发生黄绿色荧光，艰难杆菌发生绿色荧光。 3. 耐氧试验 厌氧菌必须做耐氧试验 4. 药物鉴定试验 大多数类杆菌对卡那霉素耐药，梭杆菌属敏感，厌氧菌对灭滴灵敏感，非厌氧菌耐药。 5. 聚茴香脑磺酸钠（SPS）敏感试验 厌氧消化链球菌对50g/L的SPS溶液敏感，而绝大多数其它G＋球菌耐药 6. 生化特性 主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁内肉汤生长试验、硫化氢试验，其方法多种多样。 7. 气液相色谱 气液相色谱技术（GLC）是一种以气体或液体为流动相，以涂固定液的载体为固定相。采用冲洗法的柱色谱分离技术。目前用来分析细菌终末代谢产物，结果可靠。 8．PCR、基因探针。 厌氧菌的鉴定 I级实验室应达到的标准： 根据耐氧试验结果，革兰染色，菌落特点提供厌氧菌初步推断报告。 II级实验室应达到的标准： 根据革兰染色反应，镜下形态，菌落形态，耐氧试验，用自制或国产传统生化反应试剂定种。 III级实验室应达到的标准： 除II级实验室所选择的鉴定方法外，能采用国际公认标准化鉴定系统。如API-20A、Micro ID、Vitek-ANI ，气--液相色谱仪。 简单步骤 (适用无条件作鉴定单位) 床边采样或输送培养基 　　　　　┌────────────────────┼───────────────────┐ 　　　　 涂片记录 　　　　　　厌氧血琼脂 　　　　 需氧培养 染色不匀 　　　　　平皿 羊血琼脂 典型厌氧菌 　　　　　48h35℃厌氧培养 　　　　　 中国蓝琼脂 形态可作一 　　　　　　│ 　　　　　　│ 初步报告 　　　　可疑菌落作耐氧试验 　　　　 24h 35℃需O2 ┌─────┴──────┐ 　　　　 ┌───┴───┐