气质联用仪实验指导书2016.docVIP

华南农业大学 综合性实验报告 实验项目名称：气质联用仪法（GC-MS）测定鱼油脂肪酸成分 实验项目性质：综合性实验 所属课程名称：食品仪器与分析综合实验 一 实验目的 1.1 学习气质联用仪的基本原理和应用范围。 1.2 了解气质联用仪的基本结构及其操作方法。 1.3 了解分析鱼油脂肪酸成分的方法。 二 实验原理 2.1 仪器基本原理和应用范围 质谱法可以进行有效的定性分析，但对复杂有机化合物的分析就显得无能为力；而色谱法对有机化合物是一种有效的分离分析方法，特别适合于进行有机化合物的定量分析，但定性分析则比较困难。因此，这两者的有效结合必将为化学家及生物化学家提供一个进行复杂有机化合物高效的定性、定量分析工具。像这种将两种或两种以上方法结合起来的技术称之为联用技术，将气相色谱仪和质谱仪联合起来使用的仪器叫做气-质联用仪。 气质联用仪是利用试样中各组份在气相和固定液两相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器(质谱仪)，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。 气质联用仪的工作过程是高纯载气由高压钢瓶中流出，经减压阀降压到所需压力后，通过净化干燥管使载气净化，再经稳压阀和转子流量计后，以稳定的压力、恒定的速度流经气化室与气化的样品混合，将样品气体带入色谱柱中进行分离。分离后的各组分随着载气先后流入检测器(质谱仪)，然后载气放空。检测器将物质的浓度或质量的变化转变为一定的电信号，经放大后在记录仪上记录下来，就得到色谱流出曲线。根据色谱流出曲线上得到的每个峰的保留时间，可以进行定性分析，根据峰面积或峰高的大小，可以进行定量分析。 2.2 定性分析原理 　 将待测物质的谱图与谱库中的谱图对比定性。 2.3 定量分析原理 相对定量方法（峰面积归一法）：由气质联用仪得到的总离子色谱图或质量色谱图，其色谱峰面积与相应组分含量成正比，可对某一组分进行相对定量。 绝对定量法（标准物质标定法）：配制一组合适浓度的标准样品，在最佳测定条件下，由低浓度到高浓度依次测定它们的吸光度A，以吸光度A对浓度C作图得A-C标准曲线。在相同的测定条件下，测定未知样品的吸光度，从A-C标准曲线上用内插法求出未知样品中被测元素的浓度。 三 仪器结构 实验采用的是安捷伦7890A/5975C-GC/MSD,。GC中主要包括载气系统，进样系统，分离系统，检测系统和数据处理系统；MS中主要包括就是离子源(EI)，质量分析器，检测器。 载气：一般为氦气 进样系统：包括进样装置和汽化室。样品进入汽化室后在一瞬间就被汽化， 然后随载气进入色谱柱。 分离系统：分离系统主要作用部件是色谱柱。气质用的色谱柱是毛细管柱。通常来说，一根毛细管色谱柱通常由两部分组成：管身和固定相管身。其分离效率高，分析速度快,样品用量小。其缺点是样品负荷量小，因此经常需要采用分流技术。 检测系统：气质的检测系统是质谱仪。 数据处理系统：即连接计算机。 四 实验方法 1，鱼油提取方法：索氏提取， 2，鱼油脂肪酸甲酯化：称取60 mg油脂样致具塞试管中，用移液枪移取4 mL异辛烷溶解试样。加入200 μL氢氧化钾甲醇溶液，盖上玻璃塞猛烈震摇30 s，后静置至澄清。向溶液中加入约1?g硫酸氢钠，猛烈震摇，中和氢氧化钾。待盐沉淀后，将含有甲酯的上层溶液倒入4?mL玻璃瓶中，得到的异辛烷溶液中甲酯含量约为15?mg/mL。过滤膜（0.22?μm）注入气相色谱-质谱仪中分析。 3，柱子型号：DB-5 4，载气为高纯氦气，柱流量1mL/min。 5，设置色谱条件：初温：100℃,保持5min；以10℃/min升至200℃，保持2min；再以5℃/min，升至280℃/min，保持5min。载气为高纯氦气。进样口温度：250℃； 6，设置分流比：50：1。 7，质谱条件：离子源EI，电离电压：70Ev;离子源230℃。扫描质量范围：50-500Amu。 8，进样量：1 μL 9，进样后，进行峰谱分析。 五 实验结果与分析 由实验所得峰谱，分析脂肪酸出峰情况。 由总离子流图可以看出，鱼油脂肪多为不饱和脂肪酸，在18-30min的峰不能完全分开，造成的原因可能有：（1）一次性进样量太多；（2）色谱柱污染；（3）色谱柱温度过高；（4）载气流速过高；（5）气化室体积太小。 由实验所得峰谱，查阅相关资料，核对出峰物质及相对含量 表1 鱼油胶囊中脂肪酸甲酯化学组分及含量 序号 保留时间 化学成分 相对百分含量% 1 15.595 肉豆蔻酸甲酯 3.74 2