il4和il13对支气管上皮细胞上cxc趋化因子受体cxcr4表达的影响-effects of il 4 and il 13 on cxc chemokine receptor cxc r4 expression in bronchial epithelial cells.docx

缩略语一览表英文缩写英文全称中文全称HBEsHumanbronchialepithelialcells支气管上皮细胞Th2T-helpertype-2lymphocytes辅助性2型T淋巴细胞CXCRCXCchemokinereceptorCXC细胞因子受体SDF-1αstromalcell-derivedfactor1基质细胞衍生因子1αDMEMDulbecco’smodifiedEagle’smediumDulbecco改良的最低必需培养基BALFbronchoalveolarlavagefluid支气管肺泡灌洗液AHRAirwayhyperreactivity气道高反应BKBradyKinin缓激肽BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白FBSFetalBovineSerum胎牛血清PBSphosphate-bufferedsalin磷酸盐缓冲液BALFbronchoalveolarlavagefluid肺泡灌洗液SDSSodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基硫酸钠PVDFpolyvinylidenefluoride聚偏二氟乙烯膜MCPmonocytechemoattractantprotein单核细胞趋化蛋白TSLPthymicstromallymphopoietinc胸腺基质淋巴细胞生成素IL-4和IL-13对支气管上皮细胞CXC趋化因子受体CXCR4表达的影响硕士研究生：滕捷明导师：刘瑾教授华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症医学科中文摘要研究背景：CXCR4存在于机体多种细胞表面，是趋化因子SDF-1α的特异性受体，在细胞的增殖和迁移中起着重要作用。有研究证实CXCR4及其配体SDF-1α参与了哮喘的气道炎症和气道高反应，在哮喘中发挥重要作用。Th2细胞因子IL-4和IL-13在哮喘的发病机制过程中扮演了重要角色，嗜酸性粒细胞表面CXCR4的表达在IL-4和IL-13的影响下有所改变。而哮喘中支气管上皮细胞是否表达CXCR4以及其表达是否受Th2细胞因子IL-4和IL-13的影响，目前尚未有研究报道。目的：探讨支气管上皮细胞在Th2细胞因子环境下是否表达CXCR4以及其表达是否受IL-4和IL-13的影响。方法：本实验通过用六孔板培养人支气管上皮细胞系，饥饿16h，然后用IL-4（20ng/ml）和IL-13（20ng/ml）分别及联合刺激支气管上皮细胞24h，形成Th2细胞因子环境，以体外模拟哮喘环境。通过提取蛋白，电泳，把丙烯酰胺凝胶中的蛋白转移到PVDF膜上，封闭1h，CXCR4单克隆抗体抗体孵育过夜，洗涤后加入二抗孵育1h，洗涤，ECL显色、曝光。结果：正常组HBEsCXCR4蛋白表达灰度比值为（0.54±0.07），而IL-4刺激组CXCR4蛋白表达灰度比值为（0.91±0.07），明显高于正常组（P0.05），具有统计学差异。IL-13刺激组CXCR4蛋白表达灰度比值为（1.11±0.11），与正常组比较，也明显增高（P0.05），差异具有统计学意义。IL-4+IL-13联合刺激组CXCR4蛋白表达灰度比值（1.19±0.18），明显高于正常组（P0.05），具有统计学差异。结论：该实验结果表明哮喘环境中支气管上皮细胞表面CXCR4蛋白表达上调，Th2细胞因子IL-4和IL-13均可使支气管上皮细胞表面CXCR4表达增高，说明其表达受到Th2细胞因子的调控。关键词：IL-4，IL-13，CXCR4，SDF-1α，支气管上皮细胞，哮喘，趋化因子，Th2细胞因子ExpressionOfTheCXCChemokineReceptorCXCR4InHumanBronchialEpithelialCells:RegulationByIL-4andIL-13Candidate:jiemingtengSupervisor:jinliuDepartmentofRespiratoryandCriticalCareMedicine,TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030AbstractBackgrounds:CXCR4,theonlyspecificreceptorofstromalcell-derivedfactor1α(SDF-1α),expressesinavarietyofcellsurface.Itplaysanimportantroleinthecellproliferationandmigra