il13对人肺腺癌a549细胞il13rα2表达的影响-effects of il13 on the expression of il13rα 2 in human lung adenocarcinoma a549 cells.docx

摘 要目的：本研究旨在探讨体人肺腺癌 A549 细胞 IL-13Rα2 表达情况以及 IL-13 对其表 达的影响及对其三种表现型受体分布的影响，力图探索 IL-13Rα2 能否运用于肺 腺癌靶向治疗的进一步研究。方法：1.细胞分组 人肺腺癌 A549 生长在含 10%胎牛血清、100 U/ml 青霉素和 100 U/ml 链霉素的 DMEM 高糖培养基中。细胞生长密度约 75％时将细胞接于六孔 板。分为空白组(饥饿 24 小时，不加 IL-13 刺激)和浓度组：10、20 、50 、100 ng/ml(IL-13 的刺激浓度)和时间组：12 、24、48 h(20ng/ml IL-13 的刺激时间), 各组细胞孔数为 6 孔。至细胞计数约 106/ml 或者融合度约 80％左右时血清饥饿 24 h，各组加入 IL-13。根据各组条件分别收集细胞上清液和总 RNA。2. IL-13Rα2 总 RNA 定量与质量鉴定根据试剂盒提取总 RNA 样本。3.qRT-PCR 采用 qRT-PCR 技术检测 IL-13Rα2 mRNA 的表达水平，每孔细 胞所提取的 mRNA 逆转录重复 3 次。RT 反应体系 20 μl，β-actin 作为内参对照△Ct=(CtIL-13Rα2RNA-CtΒ-actinRNA) ， △△Ct= 待 测 样 品 (CtIL-13R α2RNA -Ct Β-act inRN A) － 空 白 (CtmiRN A-CtU 6RNA ) 。 待 测 IL-13Rα2RNA 的表达情况通过 2－△△Ct 法计算。4.ELISA 检测可溶性 IL-13Rα2 含量根据试剂盒使用说明孵育和显色，测450 nm 波长条件下吸光度值(每个组设 3 个复孔取平均值)。5.流式细胞术检测胞膜型以及胞内型 IL-13Rα2 的表达 细胞数计算公式： 各实验组实际表达量百分比=各实验组表达量百分比－同型空白组表达量百分 比。结果：1.qRT-PCR 结果 浓度组结果显示空白组未受 IL-13 刺激的情况下 A549 细 胞高表达 IL-13Rα2，实验组与空白组比较显示，10ng/ml IL-13 显著下调 IL-13Rα2 mRNA 的表达（P0.05），20ng/mL IL-13 对总 IL-13Rα2 mRNA 的表达的下调作 用不显著（P0.05），随着 IL-13 刺激浓度的增加，A549 细胞 IL-13Rα2 mRNAII表达显著下调（P0.01）。实验组与空白组比较，IL-13 刺激 A549 细胞 24h ，其对 IL-13Rα2 mRNA 表达的影响不显著（P0.05），20ng/ml IL-13 刺激 A549 细胞 12h,48h，其 IL-13Rα2 mRNA 的表达量显著下调（P0.05）2.ELISA 结果ELISA 旨在观察 IL-13 对 A549 分泌型 IL-13Rα2 表达量的影 响，统计学分析各实验组与空白组分泌型 IL-13Rα2 之间无统计学差异(p0.05)。 说明在实验剂量的条件下 IL-13 对分泌型 IL-13Rα2 的表达无显著影响。3. 流 式 细 胞 术 结 果 IL-13 20ng/ml 刺 激 A549 细 胞 24h 时 表 达 胞 膜 型 IL-13Rα2 的细胞数最高，50 ng/ml 时表达胞内型 IL-13Rα2 的细胞数最高。同等 浓度条件下，胞膜型 IL-13Rα2 的表达细胞数随着 IL-13 刺激时间的增加逐渐增 加，而胞内型 IL-13Rα2 的表达细胞数随着 Il-13 刺激时间的增加逐渐减少。结论：人肺腺癌 A549 细胞自身不需任何刺激即可高表达 IL-13Rα2；分泌型 IL-13Rα2 的表达量受 IL-13 的影响不明显；IL-13 20ng/ml 时上调 A549 细胞胞膜 型 IL-13Rα2 的表达。关键词：白细胞介素 13; 白细胞介素 13 受体α2; 人肺腺癌细胞; A549IIIABSTRACTAim: This study aims to explore the expression of IL-13Rα2 in human lung adenocarcinoma cell line A549 ,IL-13 how to influence the expression of IL-13Rα2 and the distribution of receptor, tries to explore whether the use of IL-13Rα2 inadenocarcinoma of lung targeting further study treatment.Method: