结直肠癌中肿瘤转移抑制基因kiss-1启动子甲基化的相关研究-methylation of kiss - 1 promoter, a tumor metastasis suppressor gene in colorectal cancer.docxVIP

目录英语缩略词表………………………………………………………………1 引 言……………………………………………………………………2 第一部分：结直肠癌中 Kiss-1 基因启动子甲基化与 Kiss-1 基因表达的关系及临床意义1、中文摘要……………………………………………………………52、英文摘要……………………………………………………………73、材料与方法…………………………………………………………94、结果…………………………………………………………………205、讨论…………………………………………………………………276、结论…………………………………………………………………297、参考文献……………………………………………………………30第二部分：5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人结直肠癌细胞 HCT116 Kiss-1 基因表达及甲基化的影响1、中文摘要……………………………………………………………322、英文摘要……………………………………………………………353、材料与方法…………………………………………………………384、结果…………………………………………………………………445、讨论…………………………………………………………………546、结论…………………………………………………………………567、参考文献……………………………………………………………58第三部分：综述……………………………………………………………………59 致谢……………………………………………………………………67英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称HCCHuman colonrectal cancer人结直肠肿瘤 肿瘤转移抑制基因Kiss-1Kiss-1Kiss-1DNAdeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸 dNTPDeoxyribonucleotide triphosphate脱氧核苷三磷酸 mRNAmessage RNA信使 RNABpBase pair碱基对DNMTDNA methyltransferaseDNA 甲基化转移酶AZA-CdR5-aza-2-deoxycytidine5-氮杂-2’-脱氧胞苷Taq 酶Taq DNA polymerse耐热 DNA 聚合酶PCRPolymerase Chain Reaction聚合酶链式反应MSPMethylation Specific-PCR甲基化特异性 PCR实时定量反转录聚合Realtime-PCRRealtime-PCR酶链式反应EB Ethedium Bromide 溴化乙锭SAM S-adenosylmethionine S-腺苷甲硫氨酸 5mCpG 5methylated cytosine phosphate guanlsine 5CpG 岛甲基化 5mC 5methylated cytosine 5-甲基胞嘧啶DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜EDTAEthylenediamine tetraacetic and disadiunsalt乙二胺四乙酸DEPCDiethyl pyrocarbonate二乙基焦磷酰胺PBSphosphate buffered solution磷酸盐缓冲溶液ECMExtracellular matrixc细胞外基质SPSSStatistical Package For Social Science社会科学统计学软件1引言结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发病率位居全球恶性肿瘤发病率 第三位。2006 年国家卫生部的统计数据显示，我国结直肠癌死亡率已位居恶性 肿瘤第五位，且其发病率有逐年上升趋势，结直肠癌成为仅次于肺癌的第二位高 发恶性肿瘤。虽然各种综合治疗手段不断发展，但总体生存率依旧欠佳，其原因 与结直肠癌的较高的远处转移发生率以及肿瘤局部复发率密切相关。转移是结直 肠癌重要的生物学特征，也是患者主要的死亡原因。因此，抑制和治疗结直肠癌 远处转移是影响患者预后重要因素。肿瘤转移是多种转移促进基因与转移抑制基因共同参与调节的多步骤、多因 素的复杂过程，Kiss-1基因是继nm23基因之后发现的重要的肿瘤转移抑制基因， 它首先由Lee等[1]在黑色素瘤细胞株中发现，近年来日益受到关注。Kiss-1基因表 达蛋白metastin可以抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的分化和凋亡[2]；其抑 制肿瘤转移的途径主要是通过降低癌细胞的移行能力[3]、抑制肿瘤细胞的集落形 成等机制实现的[4]。本课题组前期[5,6]研究证实Kiss-1基因可能具有抑制结直肠癌 转移的作用，同时发现随着结直肠癌的恶性演进，Kiss-1基因表达呈现不断下调 的现象，但究其原因尚不明确，可能与Kiss