解淀粉芽孢杆菌anti-ca菌株抗污损生物的研究-study on anti - fouling organisms of bacillus amyloliquefaciens anti - ca strain.docxVIP

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解淀粉芽孢杆菌anti-ca菌株抗污损生物的研究-study on anti - fouling organisms of bacillus amyloliquefaciens anti - ca strain

独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成 果 , 也 不 包 含 未 获 得(注:如没有其他需要特别声明的,本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期:年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名: 导师签字:签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日IV解淀粉芽孢杆菌 anti-CA 菌株抗污损生物的研究摘要海洋污损生物对海上平台和航海设备造成了很大的危害,严重阻碍人类海上 经济和军事活动。大量研究发现,海洋生物污损的关键环节是由于污损微生物的 附着引起的,因此,研究具有抗微生物附着作用的防污剂具有重要意义。早期的 防污剂因毒性大、难降解等缺陷已逐渐被限制使用,而天然产物防污剂具有无毒 害、对环境友好等优点,目前已经成为研究的热点。然而许多天然活性产物产量 低、制备成本高、稳定性差,因此亟需寻找产量高、成本低和性质稳定的抗污损 生物防污剂。解淀粉芽孢杆菌可以产生多种活性物质,抑菌谱广,且生产过程简便、产量 高、活性物质稳定性强,已经引起人们的广泛重视。本实验室分离得到一株解淀 粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens anti-CA),研究发现该菌株对常见污损细 菌如蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、灿烂弧菌(V. splendidus)、哈维氏弧菌(V. harveyi)、交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.) 和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)均具有显著的抑菌活性。采用薄层层析(TLC)、柱层析、高效液相色谱分析(HPLC)和质谱分析(MS) 对解淀粉芽孢杆菌 anti-CA 菌株发酵产物中的活性成分进行了分离纯化和结构分 析,结果表明其活性成分为 5 个分子量分别为 993、1008、1021、1035 和 1049 的化合物。又通过液质联用(HPLC-MS)和二级质谱技术分析该组化合物的碎 片峰,然后查询文献对比发现,该组化合物为一系列分子量分别相差 14 的环脂 肽同系物,其结构由 7 个氨基酸残基组成的七肽环和侧链分别为相差 1 个 C 原 子的脂肪烃链组成,且脂肪酸参与成环。属于表面活性素类(surfactin)环脂肽, 命名为环脂肽 6-2,发酵实验表明,该化合物产量约为 0.6 g/L。采用结晶紫染色法和共聚焦扫描显微镜(CLSM)方法研究了环脂肽 6-2 对V污损细菌生物膜形成的抑制和清除活性,结果表明其可以有效抑制铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)PAO1 菌株和蜡样芽孢杆菌(B. cereus)生物膜的形成。有研究 表明,生物膜中的多糖类成分对生物膜的形成有重要作用,采用荧光定量 PCR 方法测试了 P. aeruginosa PAO1 菌株的多糖合成关键基因 PslC 的表达水平发现环 脂肽 6-2 可以降低 PslC 基因的表达量,表明该化合物对 PAO1 菌株的多糖合成 具有抑制作用,进而影响到其生物膜的形成。海带和藤壶也是引起海洋生物污损的重要生物,研究了环脂肽 6-2 抑制海带孢子萌发活性和对藤壶幼虫的毒性,结果表明,环脂肽 6-2 可以有效抑制海带孢 子的萌发,抑制效果为 EC50=0.11 ?g/mL,对藤壶幼虫也有一定的毒性,LC50=2.1?g/mL。进行了实地挂板实验,结果表明环脂肽 6-2 含量为 12.0%时的挂板具有 一定的抗污损生物的效果。关键词:解淀粉芽孢杆菌;环脂肽;抑菌;细菌生物膜;海洋污损生物。VIThe bioactivity of surfactins produced by Bacillusamyloliquefaciens anti-CA against fouling organisms

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