可溶性hla-g二聚体在体外抑制树突状细胞成熟和m1型巨噬细胞极化-soluble hla - g dimer inhibits dendritic cell maturation and m1 macrophage polarization in vitro.docxVIP

英文缩略词表1. BSA: bovine serum albumin牛血清白蛋白2. GM-CSF粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子3. M-CSF巨噬细胞集落刺激因子4. IL-4白细胞介素 4TNF-α肿瘤坏死因子αIFN-γγ 干扰素LPS脂多糖MHC: major histocompatibility complex主要组织相容性复合体FBS胎牛血清PBMC: Peripheral blood mononuclear cell外周血单个核细胞11. NK自然杀伤细胞12. DC树突状细胞13. ILT免疫球蛋白样转录子- 1 -可溶性 HLA-G 二聚体在体外抑制树突状细胞成熟和 M1 型巨噬细胞极化硕士研究生：张娣 指导教师：吴雄文教授中文摘要HLA-G 是一种非经典的 HLAⅠ类分子，可以通过与抑制性受体结合诱导广 泛的免疫耐受。大量研究证实可溶性 HLA-G 二聚体与其抑制性受体的结合力更 强，可以诱导更强的免疫耐受。这些抑制性受体包括 ILT-4 和 ILT-2，主要表达在 T 细胞，B 细胞，巨噬细胞，NK，DC 等表面。DC 是重要的抗原提呈细胞， 连接了固有免疫与适应性免疫，它们可以发现、捕获，加工处理外源性抗原并提呈给 T 细胞。它们与原始 T 细胞的相互作用在诱导 T 细胞分化成 Th1/Th2 细胞、 调节性 T 细胞中起重要作用。近年来有不少文献报道可溶性 HLA-G 二聚体能够通过与抑制性受体 ILT-4 结合抑制 DC 的成熟，但也有人报道可溶性 HLA-G 二 聚体对 DC 的成熟没有影响。本研究拟探讨可溶性 HLA-G 二聚体对 DC 成熟的 作用，以期这种二聚体可以抑制 DC 的成熟，进一步诱导 T 细胞、B 细胞的免疫 耐受，降低移植排斥反应的程度。巨噬细胞参与和促进炎症反应，根据其微环境的不同可分为经典的 M1 与选择性激活的 M2。前者与炎症反应和组织损伤有关； 后者可促进血管生成和组织修复，并且参与寄生虫感染与过敏反应，在一定条件下两者可以相互转化。由于巨噬细胞表面也存在可溶性 HLA-G 二聚体的受体， 所以本实验将探讨可溶性 HLA-G 二聚体对这两种细胞极化的影响，研究可溶性HLA-G 二聚体在炎症反应中的作用。论文分为 2 个部分，主要内容与结果如下：1. 可溶性 HLA-G 二聚体在体外可抑制树突状细胞成熟由人外周血分离得到 PBMC，贴壁单核细胞在 GM-CSF、IL-4 的作用下分化成未成熟 DC，而 TNF-α 或 IFN-γ 可促进 DC 成熟。同时在此过程中加入可溶性 HLA-G 二聚体，并设置 721.221 上清作为对照。用流式抗体 CD1a，CD83， CD40 染色，流式细胞仪检测各组细胞表面这三种分子的表达水平。检测结果显 示：可溶性 HLA-G 二聚体组 DC 表面 CD83 及 CD40 表达水平比 721.221 上清对 照组明显下降。2. 可溶性 HLA-G 二聚体在体外可抑制 M1 型巨噬细胞极化由人外周血分离得到 PBMC，贴壁单核细胞在 GM-CSF 与 LPS 刺激下得到 M1；用 M-CSF 与 IL-4 刺激得到 M2。并在实验组加入可溶性 HLA-G 二聚体， 并设置 721.221 上清作为对照。用流式抗体 CD14，CD80，CD206 染色，流式细 胞仪检测 M1 组细胞表面 CD14+CD80+的表达水平，M2 组细胞表面 CD14+CD206+ 的表达水平。流式细胞仪检测结果显示：可溶性 HLA-G 二聚体可以降低 M1 表 面 CD80 的表达水平，而对 M2 表面的 CD206 表达没有影响。关键词：可溶性 HLA-G 二聚体；树突状细胞；M1；M2The soluble HLA-G dimer can inhibit the maturation of dendritic cell and the polarization of M1 macrophage in vitroMaster candidate: Di Zhang Supervisor: Prof. Xiongwen WuAbstractHLA-G, a non-classical HLA class I molecule, induces a wide range of tolerogenic immunological effects via interaction with its inhibitory receptors. Soluble HLA-G dimer has stronger binding force with its receptors and exhibits its effects than HLA-G. These rece