力信号调控大鼠成骨细胞力生长因子表达及其对成骨细胞生理行为影响-force signal regulate that expression of force growth factor in rat osteoblasts and its influence on the physiological behavior of osteoblast.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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力信号调控大鼠成骨细胞力生长因子表达及其对成骨细胞生理行为影响-force signal regulate that expression of force growth factor in rat osteoblasts and its influence on the physiological behavior of osteoblast

目录中文摘要I英文摘要 II缩略词一览表 Ⅵ1 绪论 11.1 MGF 的背景资料及国内外研究现状1MGF 的产生1MGF 的作用2MGF 的应用31.1.4 国内外研究现状 51.2 问题的提出及研究意义 51.3 本文研究目的和研究内容 71.3.1 研究目的 71.3.2 研究内容 72 拉伸应变加载装置的结构及原理 82.1 引言 82.2 周期性基底膜拉伸应变装置 82.2.1 实验材料和设备 82.2.2 周期性基底膜拉伸应变装置的机构和工作原理 92.3 讨论 102.4 本章小结 113 成骨细胞的体外培养、纯化和鉴定 123.1 引言 123.2 成骨细胞的培养 123.2.1 实验动物 123.2.2 实验试剂及主要器材设备 123.2.3 细胞培养过程 123.3 成骨细胞的纯化 133.3.1 纯化方法 133.4 成骨细胞的形态学观察结果 133.4.1 原代培养细胞的显微镜观察结果 133.4.2 传代培养细胞的显微镜观察结果 143.5 成骨细胞的鉴定 153.5.1 Von Kossa 法染色鉴定 153.5.2 碱性磷酸酶染色鉴定 153.5.3 鉴定结果 163.6 讨论 173.7 本章小结 194 机械拉伸对成骨细胞 MGF 蛋白质表达的影响204.1 引言 204.2 材料 204.2.1 实验试剂及配制 204.2.2 实验器材及设备 214.3 实验过程 214.3.1 接种细胞及拉伸刺激 214.3.2 蛋白质的提取 224.3.3 SDS电泳224.3.4 转膜 234.3.5 蛋白质丽春红 S 染色234.3.6 封闭滤膜的免疫球蛋白结合位点 234.3.7 结合第一抗体 234.3.8 结合第二抗体 244.3.9 显色 244.4 实验结果 244.5 讨论 254.6 本章小结 265 力生长因子对成骨细胞增殖和分化的影响 275.1 引言 275.2 力生长因子对成骨细胞增殖的影响 275.2.1 实验试剂 275.2.2 实验器材及设备 275.2.3 实验原理 275.2.4 实验方法 285.2.5 实验结果及分析 285.3 力生长因子对成骨细胞分化的影响 295.3.1 实验试剂 295.3.2 实验器材及设备 295.3.3 实验方法 295.3.4 实验结果及分析 305.4 讨论 315.5 本章小结 336 力生长因子对成骨细胞相关基因的影响 346.1 引言 346.2 材料 346.2.1 实验试剂 346.2.2 实验器材及设备 356.3 实验过程 356.3.1 实验前准备 356.3.2 接种细胞 356.3.3 总 RNA 提取 356.3.4 引物的设计与合成 366.3.5 反转录合成单链 cDNA 376.3.6 PCR 反应 376.3.7 琼脂糖凝胶电泳 386.3.8 图像处理及灰度分析 386.4 实验结果 386.4.1 细胞总 RNA 质量及浓度测定 386.4.2 MGF 对成骨细胞 Col I、BMP-2、Cbfα1、OCN 表达的影响 396.5 讨论 446.6 本章小结 467 结论与展望 477.1 主要结论 477.2 后续研究工作的展望 47致谢 48参考文献 49附录 56缩略词一览表缩写词英文名称中文名称ALPalkaline phosphatase碱性磷酸酶AMP AP-1ATP2-amino-2-methyl-1-propanol activator protein-1adenosine triphosphate2-氨基-2-甲基-1-丙醇转录激活蛋白 1三磷酸腺苷BMPsbone morphogenetic proteins骨形成蛋白bpbase pair碱基对Brd UBSA5-bromo-2’-deoxyuridinebovine serum albumin5-溴-2’-脱氧尿苷牛血清白蛋白BSPbone sialoprotein骨涎蛋白Cbfα1 c-fos c-jun c-mycCGcore-binding facorα 1 proto-oncogene c-fos proto-oncogene c-jun proto-oncogene c-myccontrol group核心结合因子 α 1，即 Runx2原癌基因 c-fos 原癌基因 c-jun 原癌基因 c-myc 对照组Col IDABcollagen IdiaminobenzidineI 型胶原二氨基联苯胺DEAdiethanol二乙醇胺DMDduchenne muscul